PAb2627AP是一種親和純化的兔抗體制備，能夠結(jié)合缺氧細(xì)胞中Hypoxyprobe-1的蛋白加合物。PAb2627AP中含有疊氮化鈉以增強(qiáng)穩(wěn)定性。感興趣的組織可以通過(guò)免疫組化分析冷凍固定或福爾馬林固定的石蠟包埋切片進(jìn)行研究；也可采用Western blot或流式細(xì)胞術(shù)對(duì)組織進(jìn)行解離后分析。

注意：PAb2627AP結(jié)合缺氧細(xì)胞中匹莫噻唑的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物，但組織處理會(huì)洗去小分子肽和氨基酸加合物，因此免疫組化缺氧檢測(cè)依賴于缺氧組織中匹莫噻唑的蛋白加合物。

艾美捷Hypoxyprobe-低氧探針Omni試劑盒（HP3-XXX）：

應(yīng)用：通過(guò)免疫熒光或免疫過(guò)氧化物酶染色、西方印跡或流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞和組織的缺氧。當(dāng)Hypoxyprobe?-1 Omni試劑盒與抗兔二抗結(jié)合使用時(shí)，鼠類組織中背景非常低（Omni試劑盒中不提供二抗）。

規(guī)格：

a. Hypoxyprobe?-1 Omni試劑盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?-1（氟氧噻唑鹽酸鹽）。對(duì)于小動(dòng)物研究，典型劑量為60 mg/kg體重；對(duì)于人類研究，典型劑量為14 mg/kg體重。

b. 100毫克和200毫克試劑盒各含一個(gè)小瓶（200微升），1000毫克試劑盒含兩個(gè)小瓶，內(nèi)含親和純化的抗氟氧噻唑兔抗血清，含有0.09%的疊氮化鈉和1%的BSA作為穩(wěn)定劑。PAb2627AP的最佳稀釋度需由各研究者自行確定，但在與過(guò)氧化物酶結(jié)合的山羊抗兔抗血清結(jié)合使用時(shí)，1/50至1/200的稀釋度已被發(fā)現(xiàn)能在小鼠腫瘤組織中產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫染色效果。

不提供的試劑：

二抗兔抗體和標(biāo)準(zhǔn)的IHC試劑，如緩沖液、底物、顯色劑等。

儲(chǔ)存：

a. 將Hypoxyprobe?-1固體在室溫避光保存（也可存放在28攝氏度）。

b. 將兔PAb2627AP在2-8攝氏度保存。請(qǐng)勿冷凍。

Hypoxyprobe-低氧探針Omni試劑盒檢測(cè)說(shuō)明：

對(duì)正常或腫瘤組織缺氧的研究開(kāi)始于以60 mg/kg的劑量通過(guò)靜脈注射、腹腔注射或口服給藥Hypoxyprobe-1溶液，人體劑量為14 mg/kg。對(duì)于25克的小鼠，這相當(dāng)于1.5 mg/mouse。盡管在小鼠中使用高達(dá)400 mg/kg的劑量未發(fā)現(xiàn)毒性或組織缺氧的變化，但60 mg/kg的劑量在最低成本下能獲得良好的免疫染色。Hypoxyprobe-1在生理鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可以使用非常小的體積來(lái)給藥。

注射或攝入后，Hypoxyprobe-1會(huì)分布到所有組織，包括大腦，但只有在氧氣濃度低于14微摩爾（相當(dāng)于37°C下的部分壓力pO2 = 10 mm Hg）的細(xì)胞中才會(huì)與含巰基的蛋白質(zhì)形成加合物。除了腫瘤外，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚中的某些細(xì)胞也處于或低于10 mmHg的pO2。這些正常組織會(huì)結(jié)合Hypoxyprobe-1。

Hypoxyprobe-1在小鼠體內(nèi)的血漿半衰期約為25分鐘（有關(guān)參考，請(qǐng)參見(jiàn)www.hypoxyprobe.com的FAQ鏈接）。相比之下，老鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。在給藥后15至90分鐘內(nèi)，可以收集小鼠的目標(biāo)組織。此時(shí)，組織中的Hypoxyprobe-1在組織缺氧時(shí)會(huì)保持結(jié)合。然而，與在15到90分鐘實(shí)驗(yàn)期間組織暴露的Hypoxyprobe-1量相比，殘留的Hypoxyprobe-1量非常小，因此任何由于殘留Hypoxyprobe-1引起的非特異性結(jié)合都是不可檢測(cè)的。

除了動(dòng)物研究外，Hypoxyprobe試劑盒還可以用于細(xì)胞培養(yǎng)（請(qǐng)參見(jiàn)www.hypoxyprobe.com的應(yīng)用鏈接）。通常，細(xì)胞懸液在100至200微摩爾的Hypoxyprobe-1存在下在缺氧環(huán)境中孵育1至2小時(shí)。然后，通過(guò)細(xì)胞離心收集細(xì)胞，固定后用PAb2627PA和一種顯色或熒光的二抗進(jìn)行免疫染色。

在冷凍固定組織中免疫染色Hypoxyprobe-1加合物的程序：

大多數(shù)已發(fā)表的關(guān)于熒光免疫組織化學(xué)檢測(cè)皮莫尼達(dá)唑加合物的研究都是基于冷凍切片（例如，見(jiàn)Ljungkvist等，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 624: 1157-1168, 2005）。首先收集腫瘤或組織樣本，并直接在液氮中冷凍，直到被冷凍切割成4微米的切片。切片然后在-80°C儲(chǔ)存，直到進(jìn)行染色。

切片解凍后，置于冷丙酮（4°C）中固定10分鐘。通常，切片會(huì)用PBS沖洗并在4°C下與稀釋1:20的兔抗皮莫尼達(dá)唑抗血清PAb2627AP孵育過(guò)夜，抗血清中含有0.1%的牛血清白蛋白和0.1%的Tween 20，但研究人員被鼓勵(lì)根據(jù)特定應(yīng)用優(yōu)化稀釋度。然后，切片與FITC標(biāo)記的山羊抗兔抗體或Cy2標(biāo)記的驢抗兔Fab/2（Jackson Immuno Research Laboratories）一起孵育60分鐘。

在整個(gè)染色程序的所有步驟之間，切片會(huì)用PBS沖洗三次，每次2分鐘。

Hypoxyprobe 致力于為氧代謝紊亂引起的惡性和正常組織疾病提供診斷和治療工具。

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。