使用Hypoxyprobe?-F6試劑盒通過免疫化學(xué)檢測（包括免疫過氧化物酶法、免疫熒光法或流式細胞術(shù)）測量組織和細胞中的缺氧。（Kleiter等，國際放射腫瘤生物物理雜志64

: 592-602，2006；Ljungkvist等，國際放射腫瘤生物物理雜志62: 1157-1168，2005）

Hypoxyprobe低氧探針F6試劑盒檢測說明：

在嚙齒動物中，標(biāo)記物的研究始于將CCI-103F溶解在10% DMSO/90%花生油中的腹腔注射，劑量為60 mg/kg（見Ljungkvist等，國際放射腫瘤生物學(xué)物理學(xué)雜志62

：1157-1168，2005）。注射后60至120分鐘，采集感興趣的組織。對于CCI-103F，60 mg/kg的劑量在摩爾基礎(chǔ)上低于Hypoxyprobe, Inc提供的另一個缺氧標(biāo)記物pimonidazole HCl，但CCI-103F的血漿半衰期更長（t1/2 = 90分鐘，相比之下pimonidazole在小鼠中的半衰期為25分鐘）。

注射后，Hypoxyprobe?標(biāo)記物分布到所有組織，但僅在氧濃度低于14微摩爾（相當(dāng)于37°C時的分壓pO2 = 10 mmHg）的細胞中與含硫蛋白、肽和氨基酸形成加合物。正常組織如肝臟、腎臟和皮膚中的細胞在pO2達到或低于10 mmHg，這些組織會與Hypoxyprobe?標(biāo)記物結(jié)合。在采集時，未結(jié)合的Hypoxyprobe?標(biāo)記物會在組織缺氧時被激活并結(jié)合。然而，與典型實驗中組織暴露的標(biāo)記物量相比，殘留的Hypoxyprobe?標(biāo)記物濃度非常小，因此在組織采集時的非特異性結(jié)合是不可檢測的。除了動物研究，Hypoxyprobe?試劑盒也可用于組織培養(yǎng)中的細胞。

圖示：CCI-103F結(jié)合（右側(cè)面板F6）與pimonidazole結(jié)合（左側(cè)面板Pimo）在福爾馬林固定、石蠟包埋的犬腫瘤活檢的相鄰組織切片中的比較。免疫過氧化物酶數(shù)據(jù)顯示，F(xiàn)6結(jié)合與pimonidazole的結(jié)合非常相似。F6和pimonidazole加合物的兔抗血清無交叉反應(yīng)，這允許獨立測量這兩個標(biāo)記物的結(jié)合（見Kleiter等，國際放射腫瘤生物學(xué)物理學(xué)雜志64：592-602，2006）。

建議的免疫過氧化物酶分析CCI-103F結(jié)合在福爾馬林固定的石蠟包埋組織中的協(xié)議。Kleiter等，國際放射腫瘤生物學(xué)物理學(xué)雜志64：592-602，2006。

Hypoxyprobe?技術(shù)穩(wěn)健，鼓勵研究者進行自主修改。

艾美捷Hypoxyprobe-低氧探針F6試劑盒：

貨號：HP4-XXX

規(guī)格：

a. Hypoxyprobe?-F6試劑盒分別含有100、200或1000毫克的CCI-103F（Hypoxyprobe?–F6）。在小動物研究中，典型劑量為每公斤體重60毫克。

b. 每個試劑盒含有稀釋的抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6），其中含有0.09%的疊氮鈉和1%的牛血清白蛋白作為穩(wěn)定劑。100和200毫克的試劑盒各含有一個200微升單位的抗血清；1000毫克的試劑盒含有兩個200微升單位的抗血清。抗血清的最佳操作稀釋度需由研究人員確定，但1/200 - 1/500的稀釋度在與過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二級抗體結(jié)合時能提供強烈的免疫過氧化物酶染色。

不提供： 抗兔二級試劑或其他免疫組化試劑（緩沖液、抗原修復(fù)劑等）。

存儲：

a. 將Hypoxyprobe?–F6在暗處于室溫下保存（也可存放在2-8攝氏度）。

b. 將兔抗血清（PAbF6）存放在2-8攝氏度。

Hypoxyprobe?-F6試劑盒成分的詳細描述：

Hypoxyprobe?-F6（CCI-103F）是一種六氟化的2-硝基咪唑，具有六個磁等效的氟原子，分子量為337.2，水溶解度為5.3毫摩爾，相當(dāng)于1.8 mg/ml。CCI-103F通常通過10% DMSO/花生油混合物進行腹腔給藥（Ljungkvist等，國際放射腫瘤學(xué)、生物學(xué)與物理學(xué)雜志62

: 1157-1168，2005年）。CCI-103F在弱光下儲存時非常穩(wěn)定。CCI-103F在缺氧細胞中被還原激活，激活的中間體與蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中的硫醇（巰基）形成穩(wěn)定的共價加合物。抗CCI-103F的主要抗血清與這些加合物結(jié)合，從而可以通過免疫化學(xué)方法進行檢測。

抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6）與還原激活的CCI-103F的蛋白質(zhì)加合物結(jié)合，并以稀釋的兔抗血清形式提供，含有0.09%的疊氮鈉和1%的BSA作為穩(wěn)定劑。感興趣的組織可以通過在福爾馬林固定的石蠟包埋切片或冷凍固定切片上進行免疫組織化學(xué)分析，或通過流式細胞術(shù)和組織解離后分析，或通過西方印跡法進行研究。抗CCI-103F抗血清與CCI-103F的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物結(jié)合，但在為免疫組織化學(xué)檢測準(zhǔn)備的組織處理過程中，肽和氨基酸加合物會被洗去，因此免疫組織化學(xué)檢測僅依賴于缺氧組織中CCI-103F的蛋白質(zhì)加合物。對福爾馬林固定、石蠟包埋組織切片進行免疫過氧化物酶分析時，將組織切片與約1:500稀釋的抗CCI-103F抗血清的100微升孵育。然后施加顯色的二抗山羊抗兔二抗，以揭示缺氧標(biāo)記物加合物的分布。

Hypoxyprobe 致力于為氧代謝紊亂引起的惡性和正常組織疾病提供診斷和治療工具。

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。