癌癥免疫治療，特別是原位癌癥疫苗，是近年來(lái)癌癥治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)。STING（Stimulator of Interferon Genes）信號(hào)通路作為調(diào)節(jié)I型干擾素（IFN）反應(yīng)和抗腫瘤免疫的關(guān)鍵因子，已成為開發(fā)新型佐劑的重要靶點(diǎn)。然而，現(xiàn)有的STING激動(dòng)劑在臨床轉(zhuǎn)化中面臨多種挑戰(zhàn)，包括細(xì)胞攝取率低、STING變異需要個(gè)性化激動(dòng)劑以及IFN非依賴性信號(hào)可能促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)等。因此，尋找高效、低毒、具有明確機(jī)制的STING激動(dòng)劑對(duì)于癌癥免疫治療具有重要意義。

“Intratumoral delivery of the chitin-derived C100 adjuvant promotes robust STING, IFNAR, and CD8+ T cell-dependent anti-tumor immunity”旨在開發(fā)一種基于殼聚糖的高度脫乙酰化聚合物（HDCP）C100作為STING通路的新型激動(dòng)劑，并評(píng)估其在腫瘤內(nèi)注射后的抗腫瘤免疫效應(yīng)及其機(jī)制。

研究方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：研究采用了B16F10黑色素瘤和MC38結(jié)腸癌兩種腫瘤模型，通過(guò)腫瘤內(nèi)注射不同劑量的C100和其他HDCPs，評(píng)估其抗腫瘤效果。同時(shí)，設(shè)置了野生型（WT）和STING敲除（STING KO）、IFNAR敲除（IFNAR KO）、NLRP3敲除（NLRP3 KO）等小鼠模型，以探討C100作用的具體機(jī)制。

1.2 抗腫瘤效果評(píng)估：通過(guò)測(cè)量腫瘤體積和生存時(shí)間，評(píng)估C100及其他佐劑的抗腫瘤效果。使用不同的腫瘤模型（B16F10和MC38）進(jìn)行驗(yàn)證，以確保結(jié)果的普遍性。

1.3 機(jī)制研究：

信號(hào)通路分析：通過(guò)Western blot、qPCR等方法，檢測(cè)C100注射后腫瘤組織中STING、IFNAR、NF-κB等信號(hào)分子的表達(dá)變化。

ROS和DNA損傷檢測(cè)：使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)C100處理后細(xì)胞內(nèi)的ROS水平和DNA損傷情況。

基因表達(dá)分析：通過(guò)NanoString技術(shù)，分析C100注射后腫瘤組織中IFN和NF-κB相關(guān)基因的表達(dá)變化。

細(xì)胞耗竭實(shí)驗(yàn)：通過(guò)抗體耗竭特定免疫細(xì)胞（如NK細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞），評(píng)估它們?cè)贑100誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答中的作用。

1.4 聯(lián)合治療效果評(píng)估：將C100與抗PD-1抗體（貨號(hào)IVMB0037，來(lái)自Assay Genie）聯(lián)合使用，評(píng)估其在MC38和B16F10腫瘤模型中的協(xié)同抗腫瘤效果。

研究結(jié)論

2.1 C100的抗腫瘤效果：C100在B16F10和MC38腫瘤模型中均表現(xiàn)出顯著的抗腫瘤效果，能夠顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)并延長(zhǎng)小鼠生存期，如下圖。與其他HDCPs相比，C100的效果最佳，且其抗腫瘤效果呈劑量依賴性。

2.2 C100的作用機(jī)制：

STING和IFNAR信號(hào)通路：C100的抗腫瘤效果依賴于STING和IFNAR信號(hào)通路。在STING KO和IFNAR KO小鼠中，C100的抗腫瘤效果顯著減弱或消失。

NF-κB信號(hào)通路：與其他STING激動(dòng)劑不同，C100在激活STING信號(hào)通路的同時(shí)，不激活NF-κB信號(hào)通路。這一特性可能有助于減少腫瘤內(nèi)炎癥和促進(jìn)抗腫瘤免疫應(yīng)答。

ROS和DNA損傷：C100處理能夠誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)線粒體ROS的產(chǎn)生和DNA損傷，進(jìn)而激活cGAS-STING信號(hào)通路。這種機(jī)制避免了傳統(tǒng)STING激動(dòng)劑需要直接結(jié)合STING分子的限制。

2.3 關(guān)鍵免疫細(xì)胞：CD8+T細(xì)胞是C100誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答的關(guān)鍵細(xì)胞類型。在耗竭CD8+T細(xì)胞后，C100的抗腫瘤效果顯著減弱或消失。NK細(xì)胞在C100誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答中不起主要作用。

2.4 聯(lián)合治療效果：C100與抗PD-1抗體聯(lián)合使用能夠產(chǎn)生顯著的協(xié)同抗腫瘤效果。這種聯(lián)合療法在MC38和B16F10腫瘤模型中均表現(xiàn)出優(yōu)于單一療法的抗腫瘤效果。補(bǔ)充說(shuō)明：免疫檢查點(diǎn)阻斷療法的響應(yīng)率仍然不盡如人意，尤其是在免疫浸潤(rùn)較低的腫瘤中。因此，研究方向逐漸轉(zhuǎn)向利用局部注射佐劑的聯(lián)合策略，以促進(jìn)免疫浸潤(rùn)，并將免疫學(xué)上“冷”的腫瘤轉(zhuǎn)變?yōu)椤盁帷蹦[瘤。STING激活佐劑已被確定為局部治療的候選藥物，并作為單藥療法或與免疫檢查點(diǎn)阻斷聯(lián)合使用進(jìn)行了試驗(yàn)。為了探索C100局部注射是否能與全身性抗PD-1療法產(chǎn)生協(xié)同作用，研究采用了MC38腫瘤治療模型（下圖A）。與之前一樣，小鼠接受了三次C100的局部注射，并且在相同的時(shí)間點(diǎn)接受了腹腔注射的單克隆抗PD-1療法。與之前的結(jié)果一致，單獨(dú)注射C100延長(zhǎng)了小鼠的生存時(shí)間（下圖C），并抑制了腫瘤生長(zhǎng)（下圖B）。研究觀察到C100局部注射與全身性抗PD-1給藥之間存在協(xié)同作用，與單獨(dú)使用PBS、C100或抗PD-1相比，聯(lián)合治療顯著降低了腫瘤生長(zhǎng)速度（下圖B）。至關(guān)重要的是，在接受聯(lián)合治療的小鼠中，有50%的小鼠在研究終點(diǎn)時(shí)腫瘤消失/存活，且其平均生存時(shí)間高于單獨(dú)接受抗PD-1或C100治療的小鼠（下圖C）。當(dāng)單劑量抗PD-1與C100治療聯(lián)合使用時(shí)，這種協(xié)同作用更加明顯。此外，在通常對(duì)抗PD-1注射反應(yīng)不佳的B16治療模型中，也進(jìn)一步確認(rèn)了這種與免疫檢查點(diǎn)阻斷的協(xié)同作用。在用C100和抗PD-1聯(lián)合治療的小鼠中，觀察到對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制（下圖D）和生存率（下圖E）的協(xié)同效果。總體而言，這些結(jié)果強(qiáng)有力地支持將C100作為免疫檢查點(diǎn)阻斷聯(lián)合治療方案的一部分。

本研究成功開發(fā)了一種基于殼聚糖的高度脫乙酰化聚合物C100作為新型STING激動(dòng)劑，并驗(yàn)證了其在腫瘤內(nèi)注射后的抗腫瘤免疫效應(yīng)及其機(jī)制。C100通過(guò)誘導(dǎo)線粒體ROS產(chǎn)生和DNA損傷來(lái)激活cGAS-STING信號(hào)通路，進(jìn)而誘導(dǎo)IFN的產(chǎn)生和抗腫瘤免疫應(yīng)答。與其他STING激動(dòng)劑相比，C100具有不激活NF-κB信號(hào)通路的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，有助于減少腫瘤內(nèi)炎癥和促進(jìn)抗腫瘤免疫應(yīng)答。此外，C100與抗PD-1抗體的聯(lián)合使用能夠產(chǎn)生顯著的協(xié)同抗腫瘤效果，為癌癥免疫治療提供了新的策略。未來(lái)研究將進(jìn)一步探討C100在人類癌癥模型中的效果和機(jī)制，并推動(dòng)其向臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化。

本實(shí)驗(yàn)使用的來(lái)自assay genie的體內(nèi)注射抗體，在本研究中發(fā)揮了重要作用，通過(guò)與C100的聯(lián)合應(yīng)用，不僅增強(qiáng)了抗腫瘤效果，還為未來(lái)癌癥免疫治療提供了新的思路和方法。這一研究成果為開發(fā)新型癌癥免疫療法提供了有力支持，并有望為癌癥患者帶來(lái)新的治療希望。