自蛋白質(zhì)晶體學(xué)的早期以來，脫水一直被用作誘導(dǎo)蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)變化的工具。

艾美捷MiTeGen-JBS晶體脫水和打撈試劑盒：

產(chǎn)品型號：M-CO-

分類：室溫篩查，入門套件

自從蛋白質(zhì)晶體學(xué)誕生之初，脫水就被用作誘導(dǎo)蛋白晶體結(jié)構(gòu)變化的工具。盡管被忽視，脫水仍然是一個強(qiáng)大的工具，用于改善或至少改變蛋白晶體的衍射特性。

脫水移除了多余的溶劑，緊縮了蛋白質(zhì)分子的堆積，并減小了溶劑通道的大小。因此，有時它可以提高晶體的有序性并改善衍射分辨率。

通過移除多余的溶劑，脫水可以使快速冷凍更容易成功，特別是對于那些初始溶劑含量較高的晶體。

當(dāng)充分脫水時，許多蛋白晶體會經(jīng)歷結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，產(chǎn)生可能在晶體生長過程中難以或無法直接實(shí)現(xiàn)的替代晶體堆積。

在所有晶體后的處理中，脫水已被證明是提高晶體衍射特性最有效的方法。當(dāng)然，脫水也經(jīng)常嚴(yán)重降低晶體衍射，但（令人驚訝的是！）通過重新水合，通常可以完全恢復(fù)原始的晶體有序性。

脫水鹽和晶體脫水與搶救試劑盒被設(shè)計(jì)為一種簡單、可控和可靠的方法，用于脫水蛋白晶體，從而提供一種有效的工具來改變/改善它們的衍射特性。

MiTeGen-JBS晶體脫水和打撈試劑盒包含12種飽和鹽溶液，每種1毫升，產(chǎn)生的相對濕度范圍在22.5至97.3%之間。

MiTeGen-JBS晶體脫水和打撈試劑盒使用方法：

為了使晶體脫水，將10-20?l的鹽溶液注入MicroRT毛細(xì)管。使用凝膠加載移液管尖端將液體一直向下注入管的密封端。這將使晶體和溶液很好地分離。將MicroMount、MicroLoop或其他安裝環(huán)插入測角儀底座，然后收獲水晶。將MicroRT毛細(xì)管拉到晶體上，然后拉到測角儀底座上。顯微鏡或低倍放大鏡可以更容易地引導(dǎo)毛細(xì)管穿過晶體。在測角儀底座上涂抹少量油或油脂可以改善毛細(xì)管的密封，但一般來說不是必需的。在X射線檢查之前，讓晶體與鹽溶液平衡30分鐘（對于100?m或更小的晶體）至2小時（對于~500?m的晶體）。

圖1：脫水鹽的使用

脫水策略：

要快速確定是否存在能夠改善衍射的相對濕度，選擇一種給出相對較低最終相對濕度的鹽溶液——在60-75%的范圍內(nèi)。在將樣品封閉在MicroRT毛細(xì)管中后，立即將樣品置于X射線束中，并開始獲取一系列短曝光幀。繼續(xù)進(jìn)行，直到單元格停止變化（表明晶體已與鹽溶液達(dá)到平衡）或衍射顯著惡化。

對于更系統(tǒng)的研究表明，選擇一系列覆蓋不同相對濕度范圍的鹽溶液，比如從93%到68%。將相對濕度最高的鹽溶液注入MicroRT毛細(xì)管中，收獲一個晶體，并把毛細(xì)管拉過晶體并放到測角儀底座上。讓晶體達(dá)到平衡，然后獲取一些X射線數(shù)據(jù)幀，足夠確定單元格參數(shù)和分辨率。移除MicroRT毛細(xì)管，立即用含有下一個最高相對濕度溶液的毛細(xì)管替換它，讓晶體達(dá)到平衡，然后拍攝一些更多的幀。重復(fù)此過程，直到您探索了感興趣的相對濕度范圍。然后，戴上提供最佳衍射的鹽溶液毛細(xì)管，達(dá)到平衡，并進(jìn)行快速冷凍，以評估低溫下的衍射質(zhì)量。在這種“連續(xù)”方法中，晶體逐漸積累輻射損傷，這種損傷可能會掩蓋脫水引起的改善。

脫水實(shí)驗(yàn)也可以同時進(jìn)行。收獲幾個晶體，并將每個晶體封閉在含有不同鹽溶液的毛細(xì)管中。讓晶體達(dá)到平衡，然后檢查它們的衍射，以確定最佳鹽/濕度。在脫水過程中，晶體周圍可能會形成一些鹽晶體。這些的衍射點(diǎn)或環(huán)很容易識別，并且通常可以從您的分析中排除。

文獻(xiàn)參考：

[1] Greenspan (1977) Humidity Fixed Points of Binary SaturatedAqueous Solutions. J. Res. Nat. Bureau Standards 81A:89.

[2] Rockland (1960) Saturated Salt Solutions for Static Control ofRelative Humidity between 5° and 40° C. Analytical Chemistry32:1375.

[3] Crowfoot et al. (1941) Crystal Structures of the Proteins An XRay Study of Palmar's Lactoglobulin. Nature 141:521.

MiTeGen 致力于分子結(jié)晶研究相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)與生產(chǎn)，包括晶體生長條件篩選試劑及各種耗材與工具。艾美捷科技是MiTeGen的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。