傳統(tǒng)的2-AA和2-AB標(biāo)記試劑盒在糖苷標(biāo)記過程中使用氰硼氫化鈉作為還原劑。這種試劑是有毒的，因此在操作時應(yīng)使用通風(fēng)柜。為了符合新興的健康和安全法規(guī)，用新的VP糖苷試劑盒替換它們，該試劑盒使用的是苯并吡啶硼烷，這是一種明顯更安全的還原劑。

QA-Bio-2-AB標(biāo)記試劑盒包含以下試劑的兩套（每個試劑盒可處理15個樣本），存放在純氮氣下密封的玻璃安瓿中：

LT-KAB-A2

2-氨基苯甲酰胺（2-AB染料）

二甲基亞砜（DMSO）

醋酸

氰硼氫化鈉

LT-KAB-VP24

2-氨基苯甲酰胺（2-AB染料）

二甲基亞砜（DMSO）/醋酸溶液

2-苯并吡啶硼烷

艾美捷QA-Bio-2-AB標(biāo)記試劑盒：

貨號：LT-KAB

樣本數(shù)量：一個2-AB標(biāo)記試劑盒包含的試劑足以標(biāo)記每個試劑盒多達(dá)30個獨立的分析樣本

染料純度： >99%（高效液相色譜法）

分子量： 137

激發(fā)波長： λex 250 nm

發(fā)射波長： λem 428 nm

樣本量 ：每個樣本從25皮摩爾到25納摩爾的糖苷。

適用樣本： 任何具有自由還原末端的純化糖苷都可以被標(biāo)記。

結(jié)構(gòu)完整性 ：未檢測到（<2摩爾百分比）唾液酸、巖藻糖、硫酸或磷酸的損失。

標(biāo)記效率 ：通常>85%（取決于樣本）。

標(biāo)記選擇性： 基本上是化學(xué)計量的標(biāo)記。

協(xié)議：

1.純化糖苷：LudgerClean EB10柱（LC-EB10-A6）設(shè)計用于從蛋白質(zhì)、鹽和洗滌劑中純化糖苷。

2.將樣本轉(zhuǎn)移到反應(yīng)瓶中：對于從典型糖蛋白中獲得的糖苷池，樣本量應(yīng)在100皮摩爾至50納摩爾的范圍內(nèi)。即使是單一純糖苷，只要低至5皮摩爾也可以在隨后的高效液相色譜（HPLC）分析中被標(biāo)記和檢測。合適的反應(yīng)瓶包括小型聚丙烯微量離心管和PCR工作用管。

3.干燥樣本：如果樣本體積超過10微升，則需要將樣本干燥。如果需要將樣本干燥，則應(yīng)使用離心蒸發(fā)儀進(jìn)行。如果這不可能，則可以謹(jǐn)慎使用冷凍干燥（真空干燥），特別是要確保樣本在管底干燥成一個小的、緊湊的團(tuán)塊。不要將樣本暴露于高溫（>28°C）或極端pH值，因為這些條件會導(dǎo)致酸性催化的唾液酸損失（高溫、低pH）或糖苷還原末端的表觀異構(gòu)化（在高pH值時）。

一旦樣本干燥，然后在10微升的水中重新溶解糖苷。

4.（僅限LT-KAB-A2）準(zhǔn)備DMSO-醋酸混合物：向DMSO的瓶中加入150微升的冰醋酸，并通過移液管混合。

5.添加染料：將DMSO-醋酸混合物加入2-AB（2-氨基苯甲酰胺酸）染料的瓶中，混合直至染料溶解。

6.添加還原劑：將溶解的染料加入氰硼氫化鈉或苯并吡啶硼烷的瓶中，并通過移液管混合，直至還原劑完全溶解，制成最終的標(biāo)記試劑。

7.將標(biāo)記試劑加入樣本：將標(biāo)記試劑加入每個干燥的糖苷樣本中，蓋緊微管，徹底混合。

8.孵化：將反應(yīng)瓶放入加熱塊、沙浴或設(shè)置在65°C的干燥箱中孵化3小時。在大多數(shù)情況下，孵化時間可以縮短至2小時或延長至4小時，而不會顯著改變標(biāo)記反應(yīng)的結(jié)果。

9.離心和冷卻：孵化期結(jié)束后取出樣本，簡短離心微管，然后讓它們完全冷卻至室溫。

10.樣本清潔：建議在標(biāo)記后進(jìn)行樣本清潔，以去除多余的染料和其他標(biāo)記試劑。可以使用LudgerClean T1柱（LC-T1-A6）或S柱（LC-S-A6）進(jìn)行清潔。

QA-Bio-2-AB標(biāo)記試劑盒文獻(xiàn)參考：

Anumula KR, Dhume ST. High resolution and high sensitivity methods for oligosaccharide mapping and characterization by normal phase high performance liquid chromatography following derivatization with highly fluorescent anthranilic acid. Glycobiology 8 685-694(1998)

艾美捷科技是QA-Bio的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。