PNGase F，也稱為肽N-糖苷酶F，是一種在分子生物學(xué)和生物化學(xué)研究中常用的酶。它在研究糖蛋白方面發(fā)揮著重要作用，糖蛋白是附著有糖分子（糖鏈）的蛋白質(zhì)。PNGase F用于從糖蛋白中移除N-連接的糖鏈，使其成為各種科學(xué)應(yīng)用中的重要工具。

PNGase F的使用：

糖蛋白去糖基化：PNGase F酶促地從糖蛋白中切割N-連接的糖鏈。N-連接的糖鏈?zhǔn)且环N特定類型的糖鏈，它附著在蛋白質(zhì)氨基酸序列中的天冬酰胺（N）殘基上。

在糖蛋白分析中的重要性：從糖蛋白中移除糖鏈對(duì)于研究其底層蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能至關(guān)重要。它允許研究人員分析蛋白質(zhì)核心，準(zhǔn)確確定其分子量，并研究其生物活性。

應(yīng)用：PNGase F在各種應(yīng)用中廣泛使用，包括蛋白質(zhì)組學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)、免疫學(xué)和藥物研究。它在表征糖蛋白、理解它們?cè)诩?xì)胞過程中的作用以及開發(fā)治療藥物方面發(fā)揮著重要作用。

生物醫(yī)學(xué)研究：在生物醫(yī)學(xué)研究中，PNGase F用于分析與癌癥、糖尿病和傳染病等疾病相關(guān)的糖蛋白。它有助于識(shí)別生物標(biāo)志物和潛在的藥物靶標(biāo)。

質(zhì)量控制：在生物制藥行業(yè)中，PNGase F被用來(lái)確保基于糖蛋白的藥物（如單克隆抗體）的質(zhì)量和一致性，通過驗(yàn)證糖鏈結(jié)構(gòu)和監(jiān)測(cè)糖基化模式。

糖蛋白工程：研究人員可以使用PNGase F對(duì)糖蛋白進(jìn)行特定目的的修改，例如提高藥物效果或改變糖鏈結(jié)構(gòu)，用于研究或治療應(yīng)用。

Endo F1、Endo F2、Endo F3、Endo H和PNgase F的活性比較

艾美捷QA-Bio-PNGase F內(nèi)容：

PNGase F 在 20 mM Tris-HCl，pH 7.5

隨附20 uL 和 60 uL 包裝大小：

5倍反應(yīng)緩沖液 7.5 – 250 mM 磷酸鈉，pH 7.5

變性溶液 – 2% SDS，1 M β-巰基乙醇

Triton X-100 – 15% 溶液

比活性 >25 U/mg

活性 5 U/ml

分子量 35,000 道爾頓

pH 范圍 6-10，Z佳 pH 7.5

QA-Bio-PNGase F 協(xié)議：

向 Eppendorf 管中添加最多 200 ?g 的糖蛋白。用去離子水調(diào)整至 35 ?l 的最終體積。

添加 10 ?l 的 5倍反應(yīng)緩沖液 7.5 和 2.5 ?l 的變性溶液。在 100°C 下加熱 5 分鐘。

冷卻。添加 2.5 ul 的 Triton X-100 并混合。

向反應(yīng)中添加 2.0 ul 的酶。在 37°C 下孵育 3 小時(shí)。

特異性 切割所有天冬酰胺連接的復(fù)雜型、混合型或高甘露糖寡糖，除非是α(1-3)核心巖藻糖化的；天冬酰胺必須在兩端都有肽鍵，無(wú)Endo F

比活性 定義為在 37°C，pH 7.5 的條件下，每分鐘催化 1 微摩爾變性的牛胰核糖核酸酶 B 釋放 N-連接寡糖所需的酶量。通過 SDS-PAGE 監(jiān)測(cè)切割（切割后的牛胰核糖核酸酶 B 遷移更快）。

QA-Bio-PNGase F文獻(xiàn)參考：

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