ALFA選擇器CE（“可低溫洗脫”）是一種創(chuàng)新的親和樹脂（瓊脂糖&磁性），專為在低溫（例如4°C）下生理緩沖液中高效純化ALFA標(biāo)簽蛋白而設(shè)計(jì)。 每個(gè)單位包含10毫克ALFA洗脫肽。

ALFA選擇器CE（“可低溫洗脫”）是一種創(chuàng)新的親和樹脂，專為在低溫下生理緩沖液中高效純化ALFA標(biāo)簽蛋白而設(shè)計(jì)。

ALFA選擇器CE基于一種中等親和力（Kd ≈ 100 nM）的單域抗體（sdAb），這種抗體共價(jià)固定在4%交聯(lián)的瓊脂糖或磁性瓊脂糖珠上。 ALFA選擇器CE經(jīng)過優(yōu)化，可在4°C下使用生理緩沖液和ALFA洗脫肽進(jìn)行高效、競爭性洗脫。為此，每個(gè)單位的ALFA選擇器CE都附帶10毫克ALFA洗脫肽，足以用于25毫升洗脫緩沖液。

或者，可以在酸性或變性條件下進(jìn)行洗脫。 ALFA選擇器CE可以通過酸性或堿性條件（100 mM甘氨酸pH 2.2、150 mM NaCl或100 mM NaOH）進(jìn)行再生，即使經(jīng)過10次再生循環(huán)也不會(huì)失去容量。創(chuàng)新的、定向的、選擇性的通過柔性連接鏈連接，保證了sdAb的高度可及性，并大大消除了批次間的變化。

由于sdAb的單鏈性質(zhì)及其共價(jià)連接，在洗脫過程中，即使在惡劣條件下（例如SDS樣品緩沖液），也不會(huì)觀察到IgG的輕鏈和重鏈的“泄漏”。

因此，ALFA選擇器CE具有對(duì)ALFA融合蛋白的高特異性和卓越容量，同時(shí)顯示出可忽略不計(jì)的非特異性背景。 ALFA選擇器CE不僅與生理緩沖液兼容，還與高嚴(yán)格性緩沖液兼容。因此，ALFA選擇器CE為根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整結(jié)合和洗滌條件提供了極大的自由度。

艾美捷ALFA選擇器CE（包括ALFA肽N1520-10mg）：

貨號(hào)：N1512

克隆號(hào)： C1

宿主： 駱駝

生產(chǎn)方式： 大腸桿菌

應(yīng)用： 免疫沉淀（IP）

容量： > 3 ug ALFA標(biāo)簽GFP每uL裝填珠子

靶標(biāo)： ALFA標(biāo)簽

特異性： 識(shí)別ALFA標(biāo)簽（SRLEEELRRRLTE）

配方：50%的PBS懸浮液，含有20%乙醇。另外，提供10毫克凍干的ALFA洗脫肽。

運(yùn)輸條件： 常溫

保存條件：在4°C下保存，最長可達(dá)12個(gè)月。不要冷凍！

注意事項(xiàng)： 僅限體外使用/僅用于研究。無毒、無害、無傳染性。

實(shí)驗(yàn)示例：

使用ALFA選擇器CE從HeLa細(xì)胞裂解液中捕獲五標(biāo)簽對(duì)照蛋白DYKDDDDK-HA-MBP-Myc-ALFA（編號(hào)P0102）的示例。 使用含有一定量五標(biāo)簽對(duì)照蛋白的HeLa細(xì)胞裂解液作為輸入材料。與ALFA選擇器CE結(jié)合的蛋白使用ALFA洗脫肽（編號(hào)N1520）進(jìn)行洗脫。指示的蛋白部分通過SDS-PAGE分析，隨后進(jìn)行考馬斯藍(lán)染色。

文獻(xiàn)參考：

G?tzke H, Kilisch M, Martínez-Carranza M, Sograte-Idrissi S, Rajavel A, Schlichthaerle T, Engels N, Jungmann R, Stenmark P, Opazo F, Frey S. The ALFA-tag is a highly versatile tool for nanobody-based bioscience applications. Nat Commun. 2019 Sep 27;10(1):4403. doi: 10.1038/s41467-019-12301-7. PMID: 31562305; PMCID: PMC6764986.

Kilisch M, G?tzke H, Gere-Becker M, Crauel A, Opazo F, Frey S. Discovery and Characterization of an ALFA-Tag-Specific Affinity Resin Optimized for Protein Purification at Low Temperatures in Physiological Buffer. Biomolecules. 2021;11(2):269. Published 2021 Feb 12. doi:10.3390/biom11020269

Weyer Y, Schwabl SI, Tang X, et al. The Dsc ubiquitin ligase complex identifies transmembrane degrons to degrade orphaned proteins at the Golgi. Nat Commun. 2024;15(1):9257. Published 2024 Oct 26. doi:10.1038/s41467-024-53676-6 (IP; yeast)