ALFA選擇器ST（“超緊”）是一種創(chuàng)新的高親和力樹脂（瓊脂糖&磁性），專為高效且干凈地捕獲ALFA標(biāo)簽蛋白而設(shè)計(jì)。

ALFA選擇器ST基于一種單域抗體（sdAb），這種抗體共價(jià)固定在4%交聯(lián)的瓊脂糖或瓊脂糖磁性珠子上，能夠以極高的親和力（Kd = 26 pM）結(jié)合ALFA標(biāo)簽蛋白。 目標(biāo)蛋白可以在酸性（例如，0.1 M 甘氨酸，pH 2.2）或變性條件下從ALFA選擇器ST中高效釋放。與ALFA標(biāo)簽蛋白的極其緊密的相互作用使得使用ALFA洗脫肽的競(jìng)爭(zhēng)性洗脫效率低下。NanoTag建議使用ALFA選擇器PE進(jìn)行在生理?xiàng)l件和室溫下的競(jìng)爭(zhēng)性洗脫。對(duì)于在4°C下進(jìn)行高效洗脫，NanoTag建議使用ALFA選擇器CE。

ALFA選擇器ST的創(chuàng)新之處在于，它通過(guò)柔性連接鏈以定向和高度選擇性的方式固定活性sdAb，這不僅保證了目標(biāo)蛋白的最佳可及性，同時(shí)大大消除了批次間的變化。 由于sdAb的單鏈性質(zhì)及其共價(jià)連接，在使用強(qiáng)變性和還原條件（例如SDS樣品緩沖液）進(jìn)行洗脫時(shí)，也不會(huì)觀察到IgG的輕鏈和重鏈的“泄漏”。因此，ALFA選擇器ST具有對(duì)ALFA融合蛋白的高親和力和卓越容量，同時(shí)顯示出可忽略不計(jì)的非特異性背景。

ALFA選擇器ST不僅與生理緩沖液兼容，還與高嚴(yán)格性緩沖液兼容。 因此，ALFA選擇器ST為根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整結(jié)合和洗滌條件提供了極大的自由度。

艾美捷ALFA選擇器ST：

貨號(hào)：N1511

克隆號(hào)： 1G5

宿主： 駱駝

生產(chǎn)方式： 大腸桿菌

應(yīng)用： 免疫沉淀（IP）

容量： > 3 ug ALFA標(biāo)簽GFP每uL裝填珠子

靶標(biāo)： ALFA標(biāo)簽

特異性： 識(shí)別ALFA標(biāo)簽（SRLEEELRRRLTE）

配方：50%的PBS懸浮液，含有20%乙醇

運(yùn)輸條件： 常溫

保存條件：在4°C下保存，最長(zhǎng)可達(dá)12個(gè)月。不要冷凍！

注意事項(xiàng)： 僅限體外使用/僅用于研究。無(wú)毒、無(wú)害、無(wú)傳染性。

實(shí)驗(yàn)示例：

使用ALFA選擇器ST磁性珠子進(jìn)行一步親和純化的示例。

將純化的GFP-ALFA（左泳道）混入HeLa細(xì)胞裂解液（輸入）中，并與ALFA選擇器ST磁性珠子孵育。洗滌后，珠子依次與500 uM ALFA肽孵育2次，每次10分鐘（E1：肽），然后用SDS樣品緩沖液洗脫剩余蛋白（E2：SDS）。指示的各部分通過(guò)SDS-PAGE和考馬斯染色進(jìn)行分析。洗脫部分對(duì)應(yīng)于從1 uL樹脂洗脫的物質(zhì)；B為不含底物的對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

文獻(xiàn)參考：

Geraud M, Cristini A, Salimbeni S, et al. TDP1 mutation causing SCAN1 neurodegenerative syndrome hampers the repair of transcriptional DNA double-strand breaks. Cell Rep. 2024;43(5):114214. doi:10.1016/j.celrep.2024.114214 (CoIP; HEK293T)

van Zwam MC, Dhar A, Bosman W, et al. IntAct: A nondisruptive internal tagging strategy to study the organization and function of actin isoforms. PLoS Biol. 2024;22(3):e3002551. Published 2024 Mar 11. doi:10.1371/journal.pbio.3002551 (CoIP; HT1080 cells)

Kohler V, Kohler A, Berglund LL, et al. Nuclear Hsp104 safeguards the dormant translation machinery during quiescence. Nat Commun. 2024;15(1):315. Published 2024 Jan 5. doi:10.1038/s41467-023-44538-8 (UV-activated site-specific crosslinking; yeast)