Saphir-Bst-Turbo-GreenMaster凍干液專為等溫擴增DNA而設計。這種混合物是基于下一代基因增強的Bst聚合酶。該混合物是在恒定溫度（60至65°C）下超快速和穩(wěn)健擴增DNA的理想選擇。該酶顯示出高鏈置換活性，并產(chǎn)生高達109的擴增因子，這在PCR測定中相當于大約.30個循環(huán)。聚合酶比Saphir-Bst聚合酶（#PCR-389/#PCR-388/#PCR-387）快2-3倍，并且允許在5-10分鐘內(nèi)檢測靶基因。

艾美捷Saphir Bst Turbo GreenMaster凍干粉/Bst聚合酶（PCR-395S）：

Saphir Bst Turbo GreenMaster凍干粉：包含Saphir Bst Turbo 聚合酶、dNTPs（去氧核苷酸三磷酸）、反應緩沖液、綠色DNA嵌入染料、添加劑和穩(wěn)定劑以及PCR級水。

處理：Saphir Bst Turbo Green 大師凍干粉以8管條或96孔板的形式提供，預裝有完整的主混合物，以干燥、室溫穩(wěn)定的格式。這種凍干粉結合了高性能與使用的便利性和穩(wěn)定性。無需進行冷凍、解凍或在冰上移液。剩余的少量移液步驟Z小化了錯誤或污染的風險。每個小瓶包含進行20 μl LAMP（環(huán)介導等溫擴增）檢測所需的所有組分（除了引物和模板）。要執(zhí)行檢測，只需將小瓶用引物混合物填充并加入DNA模板。這種凍干粉還可以與ROX參照染料一起使用，在兼容ROX信號評估的PCR儀器中。在這種情況下，ROX染料（#PCR-351）應以1倍濃度添加到PCR反應中。

檢測設計：等溫擴增是一種極其敏感的檢測方法，應當注意避免實驗設置區(qū)域和設備與之前反應的DNA發(fā)生污染。一個可能出現(xiàn)的問題是，由于攜帶污染或非特異性退火引物或引物二聚體形成，導致無模板對照中出現(xiàn)擴增。

引物設計：通常，使用4種不同的引物來識別6個不同的DNA區(qū)域，允許特定目標基因的擴增。額外一對引物可以進一步加速擴增，將總檢測時間縮短至10-20分鐘。由于反應序列復雜，手動設計引物可能具有挑戰(zhàn)性。為了簡化設計過程，建議使用引物設計軟件。由于計算機設計的引物在靈敏度和非模板擴增方面可能會有所不同，建議在Z終選擇之前評估2-4組真實引物集。

檢測設置：

使用無菌過濾頭進行移液，并在與DNA制備或分析不同的區(qū)域進行設置。所有擴增中都應包括無模板對照。

首先，準備一個10倍濃度的引物預混合液。其次，設置等溫擴增檢測：

分配主混合物：將引物/探針混合物徹底振蕩（Vortex）以確保均勻性。向每個PCR管或板孔分配20微升(μl)。

? 使用特定的等溫擴增檢測儀器或?qū)崟rPCR循環(huán)儀來運行檢測。

? 將儀器設置為在60至65°C之間的恒定孵化溫度（取決于引物退火溫度）。

? 以1分鐘的間隔測量熒光強度，持續(xù)Z多30分鐘。

運輸：在常溫下運輸。

儲存條件：在常溫下儲存。

附加儲存條件：應存放在鍍鋁袋中或干燥的地方。當密封打開時，凍干粉在濕度水平超過70%的情況下可能會吸濕。

保質(zhì)期：密封包裝內(nèi)6個月。

相關產(chǎn)品：

Saphir Bst Turbo Polymerase, #PCR-390

Saphir Bst Turbo GreenMaster, #PCR-393

Saphir Bst Turbo GreenMaster high ROX, #PCR-394