Saphir-Bst GreenMaster凍干液是一種冷凍干燥的主混合物，用于使用LAMP（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增）等溫?cái)U(kuò)增DNA。該混合物基于Bst聚合酶的活性，是在恒定溫度（60至65°C）下快速、穩(wěn)健擴(kuò)增DNA的理想選擇。該酶顯示出高轉(zhuǎn)移置換活性，并產(chǎn)生高達(dá)109的擴(kuò)增因子，這與PCR測定中的約.30個(gè)循環(huán)相當(dāng)。Saphir-Bst GreenMaster凍干液允許在10-20分鐘內(nèi)檢測目標(biāo)基因。

艾美捷Bst聚合酶/Saphir Bst GreenMaster凍干粉（PCR-398S）：

內(nèi)容：Saphir Bst Green 大師凍干粉含有Saphir Bst聚合酶、dNTPs（去氧核苷酸三磷酸）、反應(yīng)緩沖液、綠色DNA嵌入染料、添加劑和穩(wěn)定劑，以凍干形式提供，用于20微升Z終檢測體積的PCR級(jí)水。

處理：Saphir Bst Green 大師凍干粉以8管條或96孔板的形式交付，預(yù)裝有完整的主混合物，以干燥、室溫穩(wěn)定的格式。這種凍干粉結(jié)合了高性能與使用的便利性和穩(wěn)定性。無需進(jìn)行冷凍、解凍或在冰上移液。剩余的少量移液步驟Z小化了錯(cuò)誤或污染的風(fēng)險(xiǎn)。每個(gè)小瓶包含進(jìn)行20微升LAMP（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增）檢測所需的所有組分（除了引物和模板）。要執(zhí)行檢測，只需將小瓶用引物混合物填充并加入DNA模板。這種凍干粉還可以與ROX參照染料一起使用，在兼容ROX信號(hào)評(píng)估的PCR儀器中。在這種情況下，ROX染料（#PCR-351）應(yīng)以1倍濃度添加到PCR反應(yīng)中。

檢測設(shè)計(jì)：等溫?cái)U(kuò)增是一種極其敏感的檢測方法，應(yīng)當(dāng)注意避免實(shí)驗(yàn)設(shè)置區(qū)域和設(shè)備與之前反應(yīng)的DNA發(fā)生污染。一個(gè)可能出現(xiàn)的問題是，由于攜帶污染或非特異性退火引物或引物二聚體形成，導(dǎo)致無模板對(duì)照中出現(xiàn)擴(kuò)增。

引物設(shè)計(jì)：通常，使用4種不同的引物來識(shí)別6個(gè)不同的DNA區(qū)域，允許特定目標(biāo)基因的擴(kuò)增。額外一對(duì)引物可以進(jìn)一步加速擴(kuò)增，將總檢測時(shí)間縮短至10-20分鐘。由于反應(yīng)序列復(fù)雜，手動(dòng)設(shè)計(jì)引物可能具有挑戰(zhàn)性。為了簡化設(shè)計(jì)過程，建議使用引物設(shè)計(jì)軟件。由于計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)的引物在靈敏度和非模板擴(kuò)增方面可能會(huì)有所不同，建議在Z終選擇之前評(píng)估2-4組真實(shí)引物集。

檢測設(shè)置：使用無菌過濾頭進(jìn)行移液，并在與DNA制備或分析不同的區(qū)域進(jìn)行設(shè)置。所有擴(kuò)增中都應(yīng)包括無模板對(duì)照。首先，準(zhǔn)備一個(gè)10倍濃度的引物預(yù)混合液。其次，設(shè)置等溫?cái)U(kuò)增檢測：

分配主混合物：將引物/探針混合物徹底振蕩（Vortex）以確保均勻性。向每個(gè)PCR管或板孔分配20微升(μl)。

? 使用特定的等溫?cái)U(kuò)增檢測儀器或?qū)崟r(shí)PCR循環(huán)儀來運(yùn)行檢測。

? 將儀器設(shè)置為在60至65°C之間的恒定孵化溫度（取決于引物退火溫度）。

? 以1分鐘的間隔測量熒光強(qiáng)度，持續(xù)Z多30分鐘。

運(yùn)輸：在常溫下運(yùn)輸。

儲(chǔ)存條件：在常溫下儲(chǔ)存。

附加儲(chǔ)存條件：應(yīng)存放在鍍鋁袋中或干燥的地方。當(dāng)密封打開時(shí)，凍干粉在濕度水平超過70%的情況下可能會(huì)吸濕。

保質(zhì)期：6個(gè)月。

相關(guān)產(chǎn)品：

Saphir Bst Polymerase, #PCR-389

Saphir Bst GreenMaster, #PCR-387

Saphir Bst GreenMaster high ROX, #PCR-388