Bst聚合酶：配合綠色熒光DNA染料，穩健擴增DNA

Bst聚合酶/Sapphire Bst GreenMaster凍干液：用于等溫DNA擴增的凍干粉，配合綠色熒光DNA染料。

艾美捷Bst聚合酶/Sapphire Bst GreenMaster凍干液（PCR-398S）：

描述：

Saphir Bst Green Master Lyophilisate是一種用于等溫DNA擴增的凍干主混合物，使用LAMP（環介導等溫擴增）技術，并配合綠色熒光DNA染料。該混合物基于Bst聚合酶的活性，是快速且穩健地在恒定溫度（60至65°C）下擴增DNA的理想選擇。該酶顯示出高鏈置換活性，可產生高達10^9的擴增因子，相當于PCR檢測中大約30個循環。

Saphir Bst Green Master Lyophilisate允許在10-20分鐘內檢測到目標基因。

Bst聚合酶內容：

Saphir Bst Green Master Lyophilisate

Saphir Bst聚合酶、dNTPs（脫氧核苷酸三磷酸）、反應緩沖液、綠色DNA插入染料、添加劑和穩定劑，以凍干形式提供，最終檢測體積為20微升。

Bst聚合酶處理：

Saphir Bst Green Master Lyophilisate以8管條或96孔板的形式提供，預裝有完整的主混合物，以干燥、室溫穩定的格式。該凍干粉結合了高性能與使用的便利性和穩定性。無需冷凍、解凍或在冰上移液。剩余的少量移液步驟最大限度地減少了錯誤或污染的風險。

每個小瓶包含所有組分（除引物和模板外），適用于20微升LAMP檢測。

要執行檢測，只需向小瓶中加入引物混合液并添加DNA模板。

該凍干粉還可以與ROX參考染料一起使用，在與ROX信號評估兼容的PCR儀器中。在這種情況下，應將ROX染料（#PCR-351）以1倍濃度添加到PCR反應中。

Bst聚合酶檢測設計：

等溫擴增是一種極其敏感的檢測方法，應小心避免將DNA污染到設置區域和設備中，以防止與之前反應的DNA交叉污染。可能會出現無模板對照中的擴增問題，原因是攜帶污染或非特異性結合引物或引物二聚體的形成。

Bst聚合酶引物設計：

通常使用4種不同的引物來識別6個不同的DNA區域，允許特異性擴增目標基因。另外一對引物可以進一步加速擴增，將總檢測時間縮短到10-20分鐘。

由于反應序列復雜，手動設計引物可能具有挑戰性。為了簡化設計過程，建議使用引物設計軟件。

由于計算機設計的引物的靈敏度和非模板擴增可能會有所不同，建議在選定最終組之前評估2-4組真實的引物集。

Bst聚合酶檢測設置：

使用無菌過濾頭的移液管，并在與DNA制備或分析不同的區域進行設置。在所有擴增中都應包括無模板對照。

首先，準備一個10倍濃度的引物預混合液。其次，設置等溫擴增檢測：

Bst聚合酶分配主混合物

徹底振蕩引物/探針混合液以確保均勻性。

向每個PCR管或板孔分配20微升。

使用特定的等溫擴增檢測儀器或實時PCR循環儀來運行檢測

將儀器設置為在60至65°C之間的恒定孵化溫度（取決于引物的退火溫度）

以1分鐘的間隔測量熒光強度，持續Z多30分鐘。

Bst聚合酶相關產品：

Saphir Bst Polymerase, #PCR-389

Saphir Bst GreenMaster, #PCR-387

Saphir Bst GreenMaster high ROX, #PCR-388