這是一種基于切割的檢測(cè)試劑盒，可以揭示特定試劑是否拮抗拓?fù)洚悩?gòu)酶II的作用或影響切割/再連接周期。使用試劑盒中提供的試劑（緩沖液、DNA、對(duì)照抑制劑）在微量離心管中組裝反應(yīng)。

作為TopoGEN在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦TopoGEN熱銷(xiāo)產(chǎn)品拓?fù)洚悩?gòu)酶II藥物篩選試劑盒（25微克SC DNA）。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

拓?fù)洚悩?gòu)酶II藥物篩選試劑盒（25微克SC DNA）：

SKU：TG1009

分類(lèi)：藥物篩選試劑盒

標(biāo)簽：1009, 藥物篩選，phot1, 超螺旋DNA底物，TG1009, Top2藥物篩選試劑盒，拓?fù)洚悩?gòu)酶2藥物篩選試劑盒

這是一個(gè)基于切割檢測(cè)的試劑盒，可以揭示特定藥物是否拮抗拓?fù)洚悩?gòu)酶II的作用或影響切割/連接循環(huán)。反應(yīng)在微量離心管中使用試劑盒提供的試劑（緩沖液、DNA、對(duì)照抑制劑）組裝。該試劑盒設(shè)計(jì)用于與TopoGEN提供的純化拓?fù)洚悩?gòu)酶II一起使用（目錄號(hào)中包含酶的試劑盒可供購(gòu)買(mǎi)）。加入酶后，反應(yīng)在37°C下孵育15-30分鐘，并通過(guò)添加SDS終止。

一個(gè)典型的反應(yīng)：

H2O：體積可變，補(bǔ)足體積（本例中為20微升）

10X測(cè)定緩沖液 2微升（由緩沖液A和B新鮮配制，詳見(jiàn)試劑盒詳情）

DNA（超螺旋）1微升

測(cè)試化合物或?qū)φ找种苿嚎勺儯ㄊ苋軇┬?yīng)限制，如對(duì)照中所述）

**純化拓?fù)洚悩?gòu)酶II：4-6單位（酶單獨(dú)出售）

在37°C下孵育15-30分鐘

加入2微升SDS；用蛋白酶K（50微克/毫升）消化

加入0.1體積樣品加載染料（試劑盒提供）

加載凝膠：1%瓊脂糖含有0.5微克/毫升的乙錠，以及試劑盒中包含的標(biāo)記DNA。

圖示中每個(gè)泳道的反應(yīng)是使用TopoGEN提供的酶和1微升DNA（0.25微克形式I pHOT-1，如每個(gè)試劑盒中提供的）進(jìn)行的。反應(yīng)產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠上分析；電泳緩沖液含有0.5微克/毫升的乙錠。然后在照片記錄前用蒸餾水去染色。切割復(fù)合物（線(xiàn)性DNA種類(lèi)）的形成清晰可見(jiàn)。此外，在所有含有VM26的反應(yīng)中，超螺旋DNA底物（形式I pRYG DNA）的松弛被抑制。試劑盒包含標(biāo)記DNA、VM-26對(duì)照抑制劑、所有緩沖液和使用試劑篩選拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑的完整說(shuō)明。手冊(cè)規(guī)定了凝膠電泳的條件以解決所有DNA形式；將得到出版質(zhì)量的凝膠。

**切割反應(yīng)需要比松弛測(cè)定更多的拓?fù)洚悩?gòu)酶II，因?yàn)榍罢呤敲傅挠?jì)量反應(yīng)。例如，上述反應(yīng)含有4單位的酶（單位由解鏈活性定義）。

拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑已被證明具有有效的抗菌、抗病毒和抗癌活性。識(shí)別拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑和拮抗劑需要使用純化酶的可行生化測(cè)定。拓?fù)洚悩?gòu)酶II藥物篩選試劑盒包含了篩選影響酶活性的試劑。為了給客戶(hù)提供最大的靈活性，一些試劑盒包括人類(lèi)Top2a，或者可以單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)。這個(gè)試劑盒將允許檢測(cè)兩類(lèi)拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑：那些刺激切割復(fù)合物形成的和那些拮抗拓?fù)洚悩?gòu)酶II對(duì)DNA作用的。試劑盒中還包括有關(guān)抑制數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)和解釋的詳細(xì)文件。已知的抑制劑作為對(duì)照物被包括在內(nèi)。這個(gè)測(cè)定中包含的DNA底物（pHOT1）非常適合這些研究，因?yàn)樗粋€(gè)單一的、高親和力的拓?fù)洚悩?gòu)酶II切割位點(diǎn)（注意拓?fù)洚悩?gòu)酶II不是特別序列特異性）。測(cè)定系統(tǒng)基于評(píng)估DNA切割產(chǎn)物的形成，這些產(chǎn)物可能是缺口的、開(kāi)環(huán)DNA或線(xiàn)性DNA。然后按照試劑盒中的描述，通過(guò)乙錠凝膠電泳來(lái)解決這些產(chǎn)物。

拓?fù)洚悩?gòu)酶II藥物篩選試劑盒內(nèi)容（以100次測(cè)定試劑盒大小為代表）：

100單位人類(lèi)Top2a（僅包含目錄號(hào)TG10091A）

超螺旋DNA [pHOT1 DNA] 25微克

線(xiàn)性pHOT1 DNA標(biāo)記

10X拓?fù)洚悩?gòu)酶II測(cè)定緩沖液組分：

*為了提高穩(wěn)定性，10x拓?fù)洚悩?gòu)酶II測(cè)定緩沖液作為兩個(gè)組分提供：緩沖液A（不含ATP）和緩沖液B（含ATP）。每次通過(guò)混合緩沖液A和B新鮮配制完整的10x測(cè)定緩沖液。

十二烷基硫酸鈉（10%）

10X凝膠加載緩沖液（溴酚藍(lán)，甘油）

對(duì)照抑制劑，依托泊苷

蛋白酶K

詳細(xì)說(shuō)明書(shū)

如果試劑盒與酶一起購(gòu)買(mǎi)，則該試劑盒在常溫下運(yùn)輸或干冰上運(yùn)輸。酶應(yīng)存放在-70°C。DNA應(yīng)存放在4°C。收到后測(cè)定緩沖液組分應(yīng)存放在-20°C。VP16可以存放在常溫下。

文獻(xiàn)參考：

Sudan, S., & Rupasinghe, H. V. (2014). Flavonoid-Enriched Apple Fraction AF4 Induces Cell Cycle Arrest, DNA Topoisomerase II Inhibition, and Apoptosis in Human Liver Cancer HepG2 Cells. Nutrition and cancer, ahead-of-print (2014): 1-10.  doi: 10.1080/01635581.2014.951733

Cheng MH, Yang YC, Wong YH, Chen TR, Lee CY, Yang CC, Chen SH, Yang IN, Yang YS, Huang HS, Yang CY, Huang MS, Chiu HF: B1, a novel topoisomerase II inhibitor, induces apoptosis and cell cycle G1 arrest in lung adenocarcinoma A549 cells.  Anti-Cancer Drugs 2012, 23(2): 191-199.  doi: 10.1097/CAD.0b013e32834cd277

Shi W, Marcus SL, Lowary TL: Cytotoxicity and topoisomerase I/II inhibition of glycosylated 2-phenyl-indoles, 2-phenyl-benzo[b]thiophenes and 2-phenyl-benzy[b]furans.  Bioorganic and Medicinal Chemistry 2010.  doi: 10.1016/j.bmc.2010.10.054

Gong Y, Firestone GL, Bjeldanes LF: 3,3′-Diindolylmethane is a novel topoisomerase IIa catalytic inhibitor that induces S-phase retardation and mitotic delay in human hepatoma HepG2 cells.  Molecular Pharmacology 2006, 69(4): 1320-1327.

美國(guó)TopoGEN創(chuàng)立于1991年, 專(zhuān)業(yè)提供拓?fù)洚悩?gòu)酶試劑和分析試劑盒，他們的藥物篩選試劑盒可用于鑒定拓?fù)洚悩?gòu)酶靶向分子，用于癌癥化療和抗菌應(yīng)用。TopoGEN還可提供檢測(cè)和定量原核（DNA回旋酶，拓?fù)洚悩?gòu)酶IV）和真核拓?fù)洚悩?gòu)酶（拓?fù)洚悩?gòu)酶I，IIa，IIb，III）的檢測(cè)試劑盒，以及全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶標(biāo)、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抗體和試劑盒補(bǔ)充試劑，DNA修復(fù)的相關(guān)系列產(chǎn)品也是他們產(chǎn)品的特色產(chǎn)品。  

作為T(mén)opoGEN在中國(guó)的代理商，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶(hù)提供全面的TopoGEN以及客戶(hù)訂制化服務(wù)。