TopoGEN現(xiàn)在提供了一種催化無活性的突變型人拓?fù)洚悩?gòu)酶I，其純化至均一性（SDS-PAGE上為單條帶）。突變是活性位點(diǎn)酪氨酸（已變?yōu)楸奖彼幔┑膯螝埢兓Ｔ撝苿┰跅U狀病毒中過表達(dá)，并在100 kDa的SDS-PAGE上親和純化為單條帶。該酶不能放松DNA（但仍能與DNA結(jié)合），并含有一個(gè)短的（6個(gè)殘基）組氨酸標(biāo)簽。

作為TopoGEN在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦TopoGEN熱銷產(chǎn)品突變型人拓?fù)洚悩?gòu)酶I (Y723F)。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

突變型人拓?fù)洚悩?gòu)酶I (Y723F)：

SKU：TG2005H-Y723F

類別：拓?fù)洚悩?gòu)酶

標(biāo)簽：人top1，突變?nèi)藅op1、top1、Topo 1、y723f

產(chǎn)品內(nèi)容

- 10微克突變型人類拓?fù)洚悩?gòu)酶I酶

- 0.5毫升10倍拓?fù)洚悩?gòu)酶I反應(yīng)緩沖液

這是純化至均一的突變型人拓?fù)洚悩?gòu)酶I的催化無活性形式。突變是活性位點(diǎn)酪氨酸（已變?yōu)楸奖彼幔┑膯螝埢兓Ｔ撝苿┰跅U狀病毒中過表達(dá)，在100 kDa的SDS-PAGE上作為單個(gè)條帶具有親和力（見下文SDS-PAGE數(shù)據(jù)）。該酶不能松弛DNA（見下文數(shù)據(jù)），并含有短（6個(gè)殘基）組氨酸標(biāo)簽。

圖顯示了純化突變體Top1的SDS-PAGE。瓊脂糖凝膠數(shù)據(jù)清楚地表明，與野生型（WT蛋白）相比，突變體是無活性的。

酪氨酸突變型人類拓?fù)洚悩?gòu)酶I質(zhì)量控制測(cè)試

在最終體積為25微升的拓?fù)洚悩?gòu)酶I反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行松弛實(shí)驗(yàn)（隨產(chǎn)品提供的10倍反應(yīng)緩沖液成分：100 mM Tris-Cl，pH 7.9，1.5 M NaCl，1% BSA，1 mM精胺，50%甘油）。每個(gè)反應(yīng)包含0.25微克超螺旋質(zhì)粒DNA。反應(yīng)用5微升（每20微升反應(yīng)體積）的停止緩沖液終止（5%十二烷基硫酸鈉，0.0025%溴酚藍(lán)，25%甘油）。反應(yīng)產(chǎn)物在1%的原生瓊脂糖凝膠上進(jìn)行分析。在這些條件下，即使使用高達(dá)0.5微克的突變蛋白，也檢測(cè)不到松弛活性。

通過檢測(cè)線性KDNA和線性質(zhì)粒DNA的形成來測(cè)試核酸酶污染。在10 mM MgCl2存在下，對(duì)1微克的連環(huán)kDNA或超螺旋pUC19 DNA進(jìn)行孵育（37°C下4小時(shí)）。在這些條件下，沒有產(chǎn)生線性DNA或分解產(chǎn)物。

與拓?fù)洚悩?gòu)酶II的交叉污染檢查結(jié)果為陰性。在拓?fù)洚悩?gòu)酶II反應(yīng)條件下，KDNA沒有發(fā)生解鏈。

突變型拓?fù)洚悩?gòu)酶I的最終分?jǐn)?shù)是柱層析池，并且處于以下緩沖液中：20mM NaH2PO4（pH7.4），300mM NaCl，500mM亞甲基。最終分?jǐn)?shù)通過SDS-PAGE分析，顯示含有一個(gè)單一的主要100 kDa條帶。

該酶在國際上通過藍(lán)色冰或干冰運(yùn)輸。將酶儲(chǔ)存在-20°C。

美國TopoGEN創(chuàng)立于1991年, 專業(yè)提供拓?fù)洚悩?gòu)酶試劑和分析試劑盒，他們的藥物篩選試劑盒可用于鑒定拓?fù)洚悩?gòu)酶靶向分子，用于癌癥化療和抗菌應(yīng)用。TopoGEN還可提供檢測(cè)和定量原核（DNA回旋酶，拓?fù)洚悩?gòu)酶IV）和真核拓?fù)洚悩?gòu)酶（拓?fù)洚悩?gòu)酶I，IIa，IIb，III）的檢測(cè)試劑盒，以及全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶標(biāo)、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抗體和試劑盒補(bǔ)充試劑，DNA修復(fù)的相關(guān)系列產(chǎn)品也是他們產(chǎn)品的特色產(chǎn)品。  

作為TopoGEN在中國的代理商，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的TopoGEN以及客戶訂制化服務(wù)。