我們使用TopoGEN工作人員開發(fā)的專有方法純化人拓撲異構(gòu)酶IIα（Top2a）。純化的酶完全沒有污染和核酸酶。它分兩步改變一種獨特拓撲異構(gòu)體的連接數(shù)，SDS-PAGE上檢測到的主要多肽為170 kDa。

作為TopoGEN在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦TopoGEN熱銷產(chǎn)品人拓撲異構(gòu)酶IIα酶。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

人拓撲異構(gòu)酶IIα酶：

SKU：TG2000H

類別：拓撲異構(gòu)酶

標(biāo)簽：人類top2、top2a、拓撲異構(gòu)酶2α

純化的人拓撲異構(gòu)酶II Alpha（Top2a）過表達并純化至均一性，SDS-PAGE上顯示為單一條帶。拓撲異構(gòu)酶II高度純化，無核酸酶污染。

人類拓撲異構(gòu)酶II質(zhì)量控制測試

核酸酶污染：通過測試線性kDNA和線性質(zhì)粒DNA的形成來進行檢測。在37°C下（在top2a實驗條件下，有或無ATP）孵育1微克的連環(huán)KDNA或超螺旋pUC19 DNA 4小時。

通過在人類拓撲異構(gòu)酶II Alpha活性被抑制的條件下檢測超螺旋DNA的松弛來評估與拓撲異構(gòu)酶I的交叉污染。過量的純化酶與pRYG DNA在無ATP（有和無Mg++）的情況下在37°C下孵育2小時。在這些條件下，不得檢測到pRYG超螺旋DNA的松弛。

當(dāng)SDS-PAGE凝膠過載純化蛋白時，可以看到一個170 kDa的主要條帶。最終分數(shù)中沒有180 kDa的拓撲異構(gòu)酶II形式。（蛋白質(zhì)濃度因批次而異，但通常在每毫升5-50微克的范圍內(nèi)。）Top2a可以提供2-10單位/微升（1單位將在37°C下30分鐘內(nèi)解連環(huán)0.2微克的KDNA）。請注意，單位定義基于首選的DNA底物，kDNA（kinetoplast DNA）。我們建議使用kDNA底物與此酶，因為質(zhì)粒DNA松弛實驗的敏感性遠不如kDNA。活性是基于kDNA解連環(huán)（而不是質(zhì)粒DNA松弛）認證的。

人類拓撲異構(gòu)酶II Alpha酶的最終分數(shù)從FPLC柱中以以下緩沖液洗脫：10%甘油，50 mM Tris（pH 7.7），1 mM EDTA和EGTA，650 mM NaCl。

人類拓撲異構(gòu)酶II Alpha實驗條件和性能質(zhì)量控制

解連環(huán)實驗使用kinetoplast DNA（KDNA）底物在最終體積為20-30微升的拓撲異構(gòu)酶II反應(yīng)緩沖液中進行（50 mM Tris-Cl，pH 8.0，120 mM KCl，10 mM MgCl2。0.5 mM ATP，0.5 mM二硫蘇糖醇），含0.2微克KDNA。反應(yīng)用5微升（每20微升反應(yīng)體積）的停止緩沖液（5%十二烷基硫酸鈉，0.0025%溴酚藍，25%甘油）終止。反應(yīng)產(chǎn)物在含有0.5微克/毫升乙酰胺的1%瓊脂糖凝膠上分析。在凝膠運行時，可以使用手持紫外線光源輕松監(jiān)測2.5 kb DNA小環(huán)解連環(huán)產(chǎn)物的分離。

Top2a在干冰上運輸，應(yīng)儲存在-70°C。我們還建議在第一次解凍后分裝酶（反復(fù)的凍融會導(dǎo)致活性損失）；酶活性穩(wěn)定1-2天（不超過）。

文獻：

Muller et al., Biochemistry 27: 8369–8379 (1988) Spitzner and Muller, Nuc. Acid. Res. 16: 5533–5556 (1988)

美國TopoGEN創(chuàng)立于1991年, 專業(yè)提供拓撲異構(gòu)酶試劑和分析試劑盒，他們的藥物篩選試劑盒可用于鑒定拓撲異構(gòu)酶靶向分子，用于癌癥化療和抗菌應(yīng)用。TopoGEN還可提供檢測和定量原核（DNA回旋酶，拓撲異構(gòu)酶IV）和真核拓撲異構(gòu)酶（拓撲異構(gòu)酶I，IIa，IIb，III）的檢測試劑盒，以及全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶標(biāo)、拓撲異構(gòu)酶抑制劑、拓撲異構(gòu)酶抗體和試劑盒補充試劑，DNA修復(fù)的相關(guān)系列產(chǎn)品也是他們產(chǎn)品的特色產(chǎn)品。  

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