高純度、催化活性的Top1酶在桿狀病毒系統(tǒng)中過表達(dá)，并純化至單帶均一性。這些制劑比由人體組織制成的天然拓?fù)洚悩?gòu)酶I便宜，純度高，比活性高。

作為TopoGEN在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦TopoGEN熱銷產(chǎn)品人拓?fù)洚悩?gòu)酶I酶。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

人拓?fù)洚悩?gòu)酶I酶：

SKU：TG2005HRC

類別：拓?fù)洚悩?gòu)酶

標(biāo)簽：人拓?fù)洚悩?gòu)酶1

高純度、具有催化活性的人拓?fù)洚悩?gòu)酶I酶在桿狀病毒系統(tǒng)中過表達(dá)并純化至單一條帶均一性。這些制劑比從人體組織中提取的天然拓?fù)洚悩?gòu)酶I便宜，并且提供出色的純度和高比活性。此外，重組拓?fù)洚悩?gòu)酶I的100 kDa形式穩(wěn)定，相對(duì)于人體細(xì)胞中的天然蛋白，更不易受到蛋白酶的降解。

拓?fù)洚悩?gòu)酶I的最終制劑在松弛質(zhì)粒DNA方面非常活躍。

人拓?fù)洚悩?gòu)酶I酶活性的滴定

使用桿狀病毒過表達(dá)系統(tǒng)制備和純化拓?fù)洚悩?gòu)酶I。通過連續(xù)2倍稀釋使用超螺旋DNA來確定活性。數(shù)據(jù)顯示，這種制劑大約滴定到8單位/微升。一個(gè)人拓?fù)洚悩?gòu)酶I單位可以在37°C下30分鐘內(nèi)松弛超過50%的0.25微克（250納克）超螺旋質(zhì)粒DNA。

包含材料

包含10X反應(yīng)緩沖液和稀釋緩沖液。這些可以單獨(dú)購買，作為TGS 10X拓?fù)洚悩?gòu)酶I反應(yīng)緩沖液（TG4095）。

質(zhì)量控制測試

1. 經(jīng)認(rèn)證，人拓?fù)洚悩?gòu)酶I無核酸酶污染。

2. 與拓?fù)洚悩?gòu)酶II的交叉污染檢查結(jié)果為陰性。在拓?fù)洚悩?gòu)酶II反應(yīng)條件下，沒有KDNA的解連環(huán)。

3. 拓?fù)洚悩?gòu)酶I的最終分?jǐn)?shù)是柱池，并且含有以下緩沖液：20mM NaH2PO4（pH7.4），300mM NaCl，50ug/ml BSA，50%甘油，50mM Imidazole。最終分?jǐn)?shù)通過SDS-PAGE分析，顯示含有一個(gè)主要的100 kDa單一條帶。

4. 活性測定。在最終體積為25微升的top1反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行松弛測定（10X反應(yīng)緩沖液——也稱為TGS——隨本產(chǎn)品提供：100 mM Tris-Cl（pH 7.9），10 mM EDTA，1.5 M NaCl，1% BSA，1 mM Spermine，50%甘油）。每個(gè)反應(yīng)包含0.25微克超螺旋質(zhì)粒DNA。反應(yīng)用5微升（每20微升反應(yīng)體積）的停止緩沖液（5%十二烷基硫酸鈉，0.0025%溴酚藍(lán)，25%甘油）終止。反應(yīng)產(chǎn)物在1%的原生瓊脂糖凝膠上分析（電泳過程中凝膠或緩沖液中不含乙酰胺）。

人拓?fù)洚悩?gòu)酶I酶在干冰上運(yùn)輸，應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C。在最佳儲(chǔ)存條件下，其壽命約為6個(gè)月。反復(fù)的凍融循環(huán)會(huì)加速活性損失。

文獻(xiàn)：

Yoshizaki A, Yanaba K, Ogawa A, Asano Y, Kadono T, Sato S: Immunization With DNA Topoisomerase I and Freund’s Complete Adjuvant Induces Skin and Lung Fibrosis and Autoimmunity via Interleukin-6 Signaling.  Arthritis and Rheumatism 2011, 63: 3575-3585.  doi: 10.1002/art.30539.

Zhang L, Sullivan P, Suyama J, et. al: Epidermal growth factor-induced heparanase nucleolar localization augments DNA topoisomerase I activity in brain metastatic breast cancer.  Molecular Cancer Research 2010, 8: 278-290. doi: 10.1158/1541-7786.MCR-09-0375

美國TopoGEN創(chuàng)立于1991年, 專業(yè)提供拓?fù)洚悩?gòu)酶試劑和分析試劑盒，他們的藥物篩選試劑盒可用于鑒定拓?fù)洚悩?gòu)酶靶向分子，用于癌癥化療和抗菌應(yīng)用。TopoGEN還可提供檢測和定量原核（DNA回旋酶，拓?fù)洚悩?gòu)酶IV）和真核拓?fù)洚悩?gòu)酶（拓?fù)洚悩?gòu)酶I，IIa，IIb，III）的檢測試劑盒，以及全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶標(biāo)、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抗體和試劑盒補(bǔ)充試劑，DNA修復(fù)的相關(guān)系列產(chǎn)品也是他們產(chǎn)品的特色產(chǎn)品。  

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