UC201試劑盒是一種基于凝膠的體外泛素化試劑盒，旨在為研究人員提供一種簡單、快速的實驗方法。該試劑盒利用熒光標(biāo)記的泛素-Alexa647進(jìn)行E3連接酶活性檢測，并通過SDS-PAGE凝膠電泳分離，使研究人員能夠直接可視化和定量分析凝膠結(jié)果，從而節(jié)省寶貴的時間和試劑。與傳統(tǒng)的基于Western blot的E3連接酶活性檢測方法相比，該試劑盒操作更為簡便，耗時更短。艾美捷作為LifeSensors的獨家代理商，將詳細(xì)介紹：

編號：UC-0201

分類：E1-E2-E3活性檢測、試劑盒與平板、研究試劑盒

概述：

泛素是一種小分子（約8.6 kDa）多肽，能夠通過其C末端與目標(biāo)蛋白上的賴氨酸殘基的氨基發(fā)生共價結(jié)合，這種結(jié)合過程被稱為單泛素化。此外，還可以通過泛素分子上存在的七個賴氨酸殘基中的任何一個，將更多的泛素分子連接到初始泛素上，形成泛素鏈，這一過程被稱為多泛素化。其中，通過泛素分子上第48位賴氨酸（K48）形成的泛素鏈?zhǔn)亲顬槿藗兯熘摹畏核鼗驯蛔C明可以改變目標(biāo)蛋白的定位、活性和/或功能。而多泛素化最常見的結(jié)果是通過蛋白酶體介導(dǎo)的目標(biāo)蛋白降解。泛素與目標(biāo)蛋白的結(jié)合需要三種不同酶的協(xié)同作用，即E1（泛素激活酶）、E2（泛素結(jié)合酶）和E3（泛素連接酶），最終在泛素的C末端與目標(biāo)蛋白上的賴氨酸殘基的ε-氨基之間形成異肽鍵。泛素E3連接酶作為支架蛋白，為泛素結(jié)合酶（E2）和目標(biāo)底物提供結(jié)合位點。通常情況下，E3連接酶介導(dǎo)泛素從E2硫酯中間體轉(zhuǎn)移到目標(biāo)蛋白的酰胺鍵上（Hershko和Ciechanover，1998）。除了對底物進(jìn)行泛素化外，E3連接酶還可以自身泛素化。這一特性被用于體外實驗中，以監(jiān)測E3連接酶的活性。本試劑盒基于凝膠的體外泛素化實驗，操作簡單、快速且易于使用。E3連接酶實驗采用熒光標(biāo)記的泛素-Alexa647進(jìn)行，并通過SDS-PAGE凝膠電泳分離，使研究人員能夠直接可視化和定量分析凝膠結(jié)果，從而節(jié)省寶貴的時間和試劑。與傳統(tǒng)的基于Western blot的E3連接酶活性檢測方法相比，該試劑盒操作更為簡便，耗時更短。

LifeSensors基于凝膠的可定制體外E3泛素連接酶活性試劑盒試劑盒組成：

10倍濃縮檢測緩沖液

可選E3連接酶

可選E2結(jié)合酶

泛素激活酶E1

泛素混合物

ATP

陽性對照E3與E2（Carp2與UBE2D3，20倍）

6倍SDS凝膠上樣緩沖液

注意事項：

儲存：所有組分應(yīng)儲存于-80°C。

穩(wěn)定性：除預(yù)涂平板外，所有組分在-80°C儲存時至少穩(wěn)定2個月。平板必須在30天內(nèi)使用。

重要提示：選擇合適的鏈霉親和素試劑對于產(chǎn)生強信號至關(guān)重要。不建議使用辣根過氧化物酶（HRP）結(jié)合的鏈霉親和素。

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