基于已知對泛素具有親和力的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域，串聯(lián)泛素結(jié)合體（TUBEs）已被開發(fā)用于分離和鑒定泛素化蛋白。TUBEs對多泛素鏈的親和力比單個泛素結(jié)合相關結(jié)構(gòu)域（UBA）高出多達1000倍。此外，TUBEs對多泛素化蛋白具有保護作用，使其即使在低豐度條件下也能被檢測到。這些特性有效地“捕獲”了處于多泛素化狀態(tài)的蛋白質(zhì)。TAMRA-TUBE 2在TUBE 2（貨號：UM202）的融合標簽上連接了一個TAMRA熒光團（激發(fā)波長 = 540 nm，發(fā)射波長 = 578 nm）。由于熒光團連接在標簽上，因此不會影響串聯(lián)泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域與多泛素鏈的結(jié)合。

艾美捷[干冰]TUBE 2(TAMRA標簽)：

貨號：UM-0502T-0050  

純度：通過反相高效液相色譜（RP-HPLC）檢測，純度>95%  

分子量：39,078 Da  

物理狀態(tài)：液體，含10%甘油的PBS溶液  

數(shù)量：50 ug，濃度為X mg/mL（取決于批次號）  

溶解性：未測定  

儲存：-80°C。避免反復凍融。

應用：

用于熒光顯微鏡的細胞/組織化學染色，檢測多泛素化蛋白。  

示例圖片：C2C12小鼠細胞。紅色：TMR-TUBE 2；藍色：抗泛素單克隆抗體FK2；綠色：DAPI（細胞核）。圖片由V. Raz提供，荷蘭萊頓大學醫(yī)學中心）

通用染色程序（最佳條件需由終端用戶通過實驗確定）：

為了獲得可檢測的信號，可能需要使用蛋白酶體抑制劑（如MG-132，貨號：SI9710）處理細胞，以促進泛素化蛋白的積累。  

使用甲醛（2-4%）固定細胞5-20分鐘。  

用PBS洗滌。  

使用0.5% Triton處理10分鐘。  

用TMR-TUBEs（推薦起始稀釋度為1:500）孵育1小時。

文獻參考：

Hjerpe, R, Aillet, F, Lopitz-Otsoa, F, Lang, V, England, P, and Rodriguez, MS., Efficient protection and isolation of ubiquitylated proteins using tandem ubiquitin-binding entities. EMBO Rep. 10,1250-1258 (2009).