一、產(chǎn)品概述

GABA 是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、心血管生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、骨骼代謝等多個研究領(lǐng)域具有關(guān)鍵作用。本試劑盒適用于一般生物樣本的檢測，可廣泛應(yīng)用于相關(guān)領(lǐng)域的研究工作。

γ - 氨基丁酸（GABA）ELISA 試劑盒是一種用于體外定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、細胞裂解液及其他生物液體中 γ - 氨基丁酸濃度的試劑盒。該檢測方法具有高靈敏度和出色的特異性，用于檢測 γ - 氨基丁酸（GABA）。實驗過程中未觀察到 γ - 氨基丁酸（GABA）與其類似物之間存在顯著的交叉反應(yīng)或干擾。艾美捷作為Abbexa中國區(qū)代理商，為大家整理了一份γ-氨基丁酸（GABA）ELISA試劑盒中文說明書。

二、Abbexaγ-氨基丁酸（GABA）ELISA試劑盒（abx150348）組成：

本試劑盒基于競爭性酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）技術(shù)。其主要組成如下：

-預(yù)包被的96孔微孔板：預(yù)先包被有特異性抗體，用于捕獲樣本中的GABA。

-標準品：用于建立標準曲線，以定量分析樣本中的GABA含量。

-標準品稀釋緩沖液：用于稀釋標準品溶液，以獲得不同濃度的標準系列。

-洗滌緩沖液：用于在各步驟中清洗微孔板，去除未結(jié)合的成分，減少背景干擾。

-檢測試劑A：生物素標記的試劑，參與競爭反應(yīng)。

-檢測試劑B：辣根過氧化物酶（HRP）標記的試劑，用于信號放大。

-稀釋液A和稀釋液B：分別用于稀釋檢測試劑A和檢測試劑B，確保其在合適的工作濃度下發(fā)揮作用。

-TMB底物：用于顯色反應(yīng)，其顏色變化與GABA的含量呈反比關(guān)系。

-終止液：用于終止反應(yīng)，使顏色變化固定，便于在特定波長下測量吸光度。

-封板膜：用于在反應(yīng)過程中封閉微孔板，防止蒸發(fā)和交叉污染。

此外，進行實驗還需要準備一些未提供的材料，如37℃恒溫箱、多道和單道移液管及無菌移液頭、洗瓶或自動微孔板清洗器、1.5ml離心管、蒸餾水、吸水濾紙、100ml和1升量筒、微孔板讀數(shù)儀（波長：450nm）以及ELISA振蕩器。

三、實驗原理

本試劑盒采用競爭性ELISA技術(shù)。預(yù)先在96孔板上包被有特異性抗體。將標準品、測試樣本和生物素偶聯(lián)試劑加入到孔中并孵育，生物素標記的GABA與未標記的GABA之間會在預(yù)包被抗體上發(fā)生競爭性抑制反應(yīng)。隨后加入HRP偶聯(lián)試劑，并再次孵育。在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的偶聯(lián)物。使用TMB底物來定量HRP酶促反應(yīng)。加入TMB底物后，只有含有足夠GABA的孔才會產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，加入酸性終止液后會變?yōu)辄S色。黃色的強度與結(jié)合在板上的GABA量成反比。在微孔板讀數(shù)儀上以450nm波長光譜光度法測量OD值，從而可以計算出GABA的濃度。

四、試劑準備

1.標準品：按照說明書推薦的體積，用標準品稀釋緩沖液配制標準品溶液。然后按照協(xié)議中的指示，使用標準品稀釋緩沖液對標準品溶液進行連續(xù)稀釋。

2.洗滌緩沖液：按照協(xié)議中的指示，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3.檢測試劑準備：計算所需的工作溶液體積。分別用稀釋液A和稀釋液B按1：100的比例稀釋檢測試劑A和檢測試劑B。

五、實驗步驟

1.設(shè)置標準、測試樣本和對照孔：在預(yù)包被的微孔板上分別設(shè)置標準孔、測試樣本孔和對照（零）孔，并記錄它們的位置。建議每個標準和樣本至少進行雙份測量。

2.加樣：向標準孔中加入50uL稀釋后的標準品，向?qū)φ眨悖┛字屑尤?0uL標準品稀釋緩沖液，向樣本孔中加入50uL稀釋后的樣本。

3.加入檢測試劑A：立即向每個孔中加入50uL檢測試劑A工作溶液。用封板膜封住微孔板，在37℃下孵育1小時。

4.洗滌：移除封板膜，棄去溶液。用1X洗滌緩沖液洗滌微孔板3次。

5.加入檢測試劑B：向每個孔中加入100uL檢測試劑B工作溶液，封板后在37℃下孵育30分鐘。

6.再次洗滌：棄去溶液，用洗滌緩沖液按前一步驟所述方法洗滌微孔板5次。

7.加入TMB底物：向每個孔中加入90uLTMB底物。用封板膜封住微孔板，在37℃下孵育10-20分鐘。避免光照。孵育時間僅供參考，最佳時間應(yīng)由最終用戶確定。不要超過30分鐘。

8.加入終止液：向每個孔中加入50uL終止液。立即在450nm波長下讀取吸光度。

六、結(jié)果計算

本實驗為競爭性實驗，因此樣本中GABA的濃度與其測量的吸光度呈反比關(guān)系。創(chuàng)建一個以標準濃度的對數(shù)（y軸）和平均吸光度（x軸）為坐標的圖表。通過標準點繪制最佳擬合趨勢線。可以從標準曲線上插值計算出樣本中GABA的濃度。

七、實驗精密度

1.批內(nèi)精密度（同一批次內(nèi)的精密度）：對低、中、高三個水平的GABA樣本進行20次測試，均在同一塊微孔板上進行。變異系數(shù)（CV%）=（標準差/平均值）×100。批內(nèi)精密度：CV<10%。

2.批間精密度（不同批次之間的精密度）：對低、中、高三個水平的GABA樣本在3塊不同的微孔板上進行測試，每塊微孔板上各有8個重復(fù)樣本。批間精密度：CV<12%。

八、產(chǎn)品特性

-檢測范圍：4.94pg/ml-400pg/ml

-靈敏度：<2.17pg/ml

-標準品形式：凍干

-檢測方法：比色法

-樣本類型：血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、細胞裂解液及其他生物液體

-目標類型：抗原

九、注意事項

1.僅用于研究目的：本產(chǎn)品僅供研究使用，不得用于診斷或治療用途。

2.范圍和靈敏度可能發(fā)生變化：范圍和靈敏度可能會發(fā)生變化。

3.樣本濃度要求：為獲得準確結(jié)果，樣本濃度必須稀釋至試劑盒的中等范圍內(nèi)。

4.樣本類型優(yōu)化：請注意，Abbexa的試劑盒針對天然樣本的檢測進行了優(yōu)化，而不是重組蛋白。Abbexa無法保證檢測重組蛋白，因為它們可能具有與天然蛋白不同的序列或三級結(jié)構(gòu)。

十、存儲與有效期

-存儲條件：試劑盒在運輸過程中應(yīng)保持在4℃。收到后，請按照試劑盒說明書中的存儲說明進行存儲。

-有效期：本試劑盒的有效期至少為6個月。如需更長時間的有效期（最長可達12個月），請?zhí)崆奥?lián)系A(chǔ)bbexa。

-穩(wěn)定性：試劑盒的穩(wěn)定性由活性損失率決定。在適當?shù)拇鎯l件下，有效期內(nèi)的損失率小于5%。為減少性能波動，應(yīng)嚴格控制操作流程和實驗室條件。

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