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彗星實(shí)驗(yàn)(Comet assay)也被稱為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一種在單細(xì)胞水平上檢測DNA損傷的技術(shù)。
彗星分析專用玻片
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 說明 |
| STA-352 | Comet Assay Slides, 3-Well | 5 slides | |
| STA-353 | 25 slides | ||
| STA-353-5 | 5 x 25 slides | ||
| STA-356 | Comet Assay Slides, 96-Well | 1 slide | |
| STA-356-5 | 5 slides |
彗星分析試劑盒
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 說明 |
| STA-350 | Comet Assay Kits, 3-Well | 15 assays | |
| STA-351 | 75 assays | ||
| STA-351-5 | 5 x 75 assays | ||
| STA-355 | Comet Assay Kits, 96-Well | 96 assays | |
| STA-355-5 | 5 x 96 assays |
常見問題解析:
Q1:彗星玻片是否可以單獨(dú)提供?
A1:可以的。有對應(yīng)單獨(dú)玻片的產(chǎn)品:cat#STA-352 3孔/玻片,共5片;cat#STA-353 3孔/玻片,共25片;cat#STA-356 96孔/玻片,共1片
Q2:彗星玻片可以重復(fù)使用嗎?
A2:不能。彗星玻片表面經(jīng)過了特殊處理,一旦整個玻片經(jīng)歷了變性,電泳和洗滌的操作步驟,就不能再重復(fù)使用了。
Q3:可以用常規(guī)載玻片代替試劑盒中的彗星玻片嗎?
A3:不能,彗星玻片經(jīng)過化學(xué)預(yù)處理,以增加附著力。如果采用常規(guī)載玻片的話,您的細(xì)胞/瓊脂糖液滴將無法停留在載玻片上。
Q4:彗星玻片有多厚?
A4:1.0mm(底層厚度,不包含藍(lán)色層)
Q5:該彗星分析試劑盒適合用哪種電泳儀?
A5:該彗星分析試劑盒可用于任何水平電泳槽,不限于任何特定型號,但不能使垂直電泳儀。
Q6:該試劑盒是否適用于植物組織樣本?
A6:可以用于植物組織。彗星試劑盒用于檢測單細(xì)胞懸液的DNA損傷,與任何細(xì)胞類型兼容,只要將樣本制備為單細(xì)胞懸液即可。
Q7:用試劑盒的Vista Green染料染色后,玻片可以保存多久?
A7:用Vista Green染色后的玻片可在4℃的黑暗環(huán)境中保存3個月,熒光也不褪色。 干燥且未沾有Vista Green的載玻片可以保存一年。
Q8:說明書中配置電泳液的過程中沒有提到是否需要滅菌?
A8:不需要滅菌。如果配置的過程中發(fā)現(xiàn)有不溶物,可以進(jìn)行過濾處理。
Q9:什么是好的陽性對照?
A9:用20uM依托泊苷(etoposide)培養(yǎng)細(xì)胞4小時,作為彗星實(shí)驗(yàn)的陽性對照。
Q10:是否有化合物誘導(dǎo)DNA損傷的彗星分析數(shù)據(jù)供參考呢?
A10:與ELISA不同,彗星實(shí)驗(yàn)不提供對照,因?yàn)槿魏五缧菍?shí)驗(yàn)結(jié)果都將根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件的不同而變化。例如,如果電泳條件不同,則包含相同數(shù)量 DNA 損傷的細(xì)胞的尾巴大小可能會不同。所以,與我們的結(jié)果或其他研究人員的結(jié)果進(jìn)行比較將毫無意義,因?yàn)閮烧咧g的條件永遠(yuǎn)不會相同。如果您有興趣測試化合物對DNA損傷的影響,建議保持所有實(shí)驗(yàn)條件一致,并使用相同的運(yùn)行時間和軟件進(jìn)行分析。
Q11:如何防止瓊脂糖凝膠從載玻片上脫落?
A11:彗星玻片經(jīng)過化學(xué)處理,表面帶有粘性,可吸附瓊脂糖。瓊脂糖從玻片上脫落,主要是因?yàn)榄傊?細(xì)胞混合液添加到玻片孔上時,未完全覆蓋。必須保證瓊脂糖凝膠完全覆蓋在孔上,另外玻片始終保持水平狀態(tài)也很重要。
2020~2021最新發(fā)表文章:
1.Maksimova, V. et al. (2021). HeLa TI cell-based assay as a new approach to screen for chemicals able to reactivate the expression of epigenetically silenced genes.PLoS One.16(6):e0252504. doi: 10.1371/journal.pone.0252504.
2.Chong, S.J.F. et al. (2020). Serine-70 phosphorylated Bcl-2 prevents oxidative stress-induced DNA damage by modulating the mitochondrial redox metabolism.Nucleic Acids Res. doi: 10.1093/nar/gkaa1110.
3.Prendergast, L. et al. (2020). Histone chaperone FACT is essential to overcome replication stress in mammalian cells.Oncogene. doi: 10.1038/s41388-020-1346-9.
4.Kong, L.R. et al. (2020). Targeting codon 158 p53-mutant cancers via the induction of p53 acetylation.Nat Commun.11(1):2086. doi: 10.1038/s41467-020-15608-y.
5.Kisin, E. R. et al. (2020). Enhanced morphological transformation of human lung epithelial cells by continuous exposure to cellulose nanocrystals.Chemosphere. doi: 10.1016/j.chemosphere.2020.126170.
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