彗星實(shí)驗(yàn)（Comet assay）也被稱為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一種在單細(xì)胞水平上檢測DNA損傷的技術(shù)。當(dāng)各種內(nèi)源性和外源性DNA損傷因子（氧化和環(huán)境壓力等）誘發(fā)細(xì)胞DNA鏈斷裂時(shí)，其超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞，在細(xì)胞裂解液作用下，細(xì)胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞，細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA以及其他成分均擴(kuò)散到電解液中，而核DNA由于分子量太大不能進(jìn)入凝膠而留在原位。電泳過程中，如果DNA沒有損傷，則將停留在原位，染色后呈圓形的熒光團(tuán)，無拖尾出現(xiàn)。如果DNA受損，斷裂的碎片進(jìn)入到凝膠中，在電場的作用下，DNA碎片離開原位向陽極遷移，形成拖尾。DNA受損越嚴(yán)重，斷裂越多，產(chǎn)生的碎片就越多、越小，則向陽極遷移的DNA碎片量就越多，遷移距離也越長，熒光染色后就能看見“彗星”樣尾長并且熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。  

艾美捷科技作為專業(yè)的生命科學(xué)領(lǐng)域解決方案供應(yīng)商，為您推薦Enzo Life Sciences品牌特色的彗星檢測試劑盒——Comet SCGE assay kit（貨號(hào)：ADI-900-166）。產(chǎn)品僅限用于科研學(xué)術(shù)研究用途，不得用于醫(yī)療與診斷。

ADI-900-166彗星檢測試劑盒內(nèi)提供了彗星分析所需的所有必需試劑，包括裂解液（Lysis Solution）、彗星分析凝膠（Comet LMAgarose）、熒光染料（CYGREEN Nucleic Acid Dye）、彗星分析玻片（Comet Slide）等其它試劑。  

Enzo的彗星檢測試劑盒的介紹&原理：該分析的原理是基于變性、斷裂的DNA片段在電場的影響下遷移出細(xì)胞的能力，而未受損的DNA遷移較慢并在施加電流時(shí)保持在類核范圍內(nèi)。對(duì)DNA“彗星”尾部形狀和遷移模式的評(píng)估可以用來評(píng)估DNA損傷。在該測定中，細(xì)胞被固定在彗星玻片上的瓊脂糖床中。在溫和的細(xì)胞裂解后，用堿處理樣品以解開DNA并使DNA變性。然后將樣品進(jìn)行電泳并用熒光DNA嵌入染料進(jìn)行染色。然后通過熒光顯微鏡觀察樣品。對(duì)于那些沒有熒光顯微鏡的研究人員來說，銀染是一種選擇，它允許用標(biāo)準(zhǔn)的光顯微鏡進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。   

電泳步驟可以使用TBE buffer或堿性電泳溶液進(jìn)行。TBE避免了與使用無緩沖堿進(jìn)行電泳相關(guān)的問題，例如由于鈉離子的電荷飽和而導(dǎo)致DNA遷移不良以及難以控制電壓。TBE是分析細(xì)胞凋亡的首選，并且可以使用尾長而不是尾矩進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。堿性電泳更靈敏，可以檢測到更少量的損傷。以非常低的電流運(yùn)行時(shí)，電泳時(shí)間可延長至40分鐘。如果根據(jù)彗星尾部長度的大小對(duì)彗星進(jìn)行評(píng)分，則可以對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行定性分析。使用計(jì)算尾長和尾矩的幾種商業(yè)可用的圖像分析軟件包之一分析結(jié)果，可以很容易地生成定量和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。   

Enzo的彗星SCGE實(shí)驗(yàn)的彗星玻片經(jīng)過特殊處理，以促進(jìn)低熔點(diǎn)瓊脂糖的粘附。這消除了耗時(shí)和不可靠的傳統(tǒng)方法制備瓊脂糖基層膠。彗星玻片的使用縮短了分析時(shí)間，允許對(duì)大量樣品進(jìn)行快速可靠的分析。    

目前有兩種常見的彗星實(shí)驗(yàn)檢測方式——堿性處理&中性處理。在堿性處理?xiàng)l件下，DNA發(fā)生變性，因而可檢測包括單鏈及雙鏈斷裂在內(nèi)的所有DNA損傷；在中性處理?xiàng)l件下，DNA維持雙鏈構(gòu)象，因而主要檢測雙鏈斷裂。  

Enzo的彗星檢測試劑盒的優(yōu)勢：

（1）即用型彗星玻片無需預(yù)處理即可直接應(yīng)用樣品； 

（2）更短的測定時(shí)間允許更高通量的樣品分析； 

（3）疏水屏障允許使用DNA修復(fù)酶處理樣品； 

（4）與溴化乙錠相比，獨(dú)特的核酸染料可提高DNA可視化的靈敏度。  

Enzo的彗星檢測試劑盒的應(yīng)用：

Enzo的彗星檢測試劑盒-【2021年最新發(fā)表文章】：

1. Assessment of mutations induced by cold atmospheric plasma jet treatment relative to known mutagens in Escherichia coli: B.L. Patenall, et al.; Mutagenesis 36, 380 (2021).

2. Bleomycin induces fibrotic transformation of bone marrow stromal cells to treat height loss of intervertebral disc through the TGFβR1/Smad2/3 pathway: X. Yang, et al.; Stem Cell Res. Ther. 12, 34 (2021).

3. Chronic exposure to Cytolethal Distending Toxin (CDT) promotes a cGAS-dependent type I interferon response: B.J. Pons, et al.; Cell. Mol. Life Sci. 78, 6319 (2021).

4. Rising levels of antioxidative phyllobilins in stored agricultural produce and their impact on consumer acceptance: C.A. Karg, et al.; NPJ Sci. Food 5, 1038 (2021).

5. Sanguinarine mediated apoptosis in Non-Small Cell Lung Cancer via generation of reactive oxygen species and suppression of JAK/STAT pathway: K.S. Prabhu, et al.; Biomed. Pharmacother. 144, 112358 (2021).

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