【前情回顧】活化T淋巴細(xì)胞篩選——多色流式細(xì)胞術(shù)解決方案

B細(xì)胞對抗原的免疫應(yīng)答有兩種情況：一種是胸腺非依賴性抗原（thymus-independent antigen，TI抗原），大多為多糖類和脂類抗原，不需要T細(xì)胞的輔助，就可直接激活B細(xì)胞產(chǎn)生IgM類抗體，主要由B1細(xì)胞介導(dǎo)，其抗原受體多樣性有限，特異性差；另一種是胸腺依賴性抗原（thymus-dependent antigen，TD抗原），為蛋白類抗原，主要由B2細(xì)胞介導(dǎo)，激活B細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答需要T細(xì)胞的輔助，其間會經(jīng)歷抗體親和力成熟、類別轉(zhuǎn)換和記憶B細(xì)胞形成等過程。

所以在B細(xì)胞的分化過程主要可分為前B細(xì)胞（Pre-B cell）、不成熟B細(xì)胞(immature B cell)、成熟B細(xì)胞(mature B cell)、活化B細(xì)胞(activated B cell)和漿細(xì)胞(plasma cell)五個階段。其中前B細(xì)胞和不成熟B細(xì)胞的分化是胸腺非依賴性的，其分化過程在骨髓中進(jìn)行。胸腺依賴階段是指成熟B細(xì)胞在抗原刺激后活化，在抗原提呈細(xì)胞和Th細(xì)胞的輔助下成為活化B細(xì)胞，進(jìn)而分化為合成和分泌抗體的漿細(xì)胞，這個階段的分化主要是在外周免疫器官中進(jìn)行的。

B細(xì)胞分化的各個階段可以通過評估不同的細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)和水平來確定，這些標(biāo)志物的表達(dá)和水平在B細(xì)胞分化的整個過程中都受到調(diào)節(jié)。前B細(xì)胞胞漿中可檢測到IgM的重鏈u鏈，但無輕鏈，也無膜表面Ig的表達(dá)，因此缺乏對抗原的反應(yīng)能力。末端脫氧核甘酸轉(zhuǎn)移酶（terminal deoxy nucleotidyl transferase TdT）以及CD10可表達(dá)在前B細(xì)胞，進(jìn)入非成熟B細(xì)胞后這兩種標(biāo)志即消失，因此TdT和CD10對于區(qū)分前B細(xì)胞與B細(xì)胞其它發(fā)育階段非常有用。CD19、CD20和MHCI類抗原在此階段開始表達(dá)。前B細(xì)胞對抗原無應(yīng)答能力；不成熟B細(xì)胞開始表達(dá)mIgM，但如與抗原結(jié)合，則產(chǎn)生負(fù)應(yīng)答，使B細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槭芤种茽顟B(tài)，不能繼續(xù)分化為成熟的B細(xì)胞，這是形成自身免疫耐受的機(jī)制之一，CD19、CD20和MHCI類抗原表達(dá)量增加，并可開始表達(dá)CD21抗原；骨髓中發(fā)育成熟B細(xì)胞經(jīng)血液遷移至外周淋巴器官，此時膜表面同時表達(dá)mIgM和mIgD，mIgD的表達(dá)防止了B細(xì)胞與抗原結(jié)合后所引起的免疫耐受；成熟B細(xì)胞接受抗原刺激后，在抗原提呈細(xì)胞和Th細(xì)胞的輔助下成為活化B細(xì)胞，進(jìn)而分化為漿細(xì)胞，合成和分泌各類免疫球蛋白，同時獲得了PC-1等漿細(xì)胞特異性標(biāo)志，而mIg，MHCI類抗原、CD19、CD20、CD21等標(biāo)記消失。

由此可知，B細(xì)胞及其分化亞群可以根據(jù)細(xì)胞表面表達(dá)的不同標(biāo)志物而區(qū)分。選擇這些結(jié)合了熒光的抗體直接標(biāo)記這些標(biāo)志物之后，就可以通過多色流式分析技術(shù)實現(xiàn)對抗體分泌B細(xì)胞的篩選。

流式細(xì)胞術(shù)研究專家exbio可提供抗體分泌B細(xì)胞篩選試劑盒，助您實現(xiàn)B細(xì)胞的免疫分型。

試劑盒中抗體信息：

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結(jié)果分析：

需要住院的COVID-19患者中免疫細(xì)胞頻率動力學(xué)的事例。

上圖設(shè)門分析顯示了用于鑒定患者外周全血中抗體分泌細(xì)胞（ASC）亞群；下圖顯示了患者住院期間幾個時間點測得的細(xì)胞頻率（占B細(xì)胞的百分比）。

流式細(xì)胞術(shù)表型鑒定正常人外周血全血中的抗體分泌細(xì)胞（ASC）的策略：

1.單重態(tài)細(xì)胞

2.白細(xì)胞

3.單核細(xì)胞

4.CD19 + B淋巴細(xì)胞

5.CD19 + CD27 +記憶B淋巴細(xì)胞

6.CD19 + CD27 + CD38 +抗體分泌細(xì)胞

7.IgD +非轉(zhuǎn)換和IgD-級轉(zhuǎn)換的成漿細(xì)胞

使用ED7704 抗體分泌B細(xì)胞篩選試劑盒在正常人外周血中對循環(huán)的抗體分泌細(xì)胞（CD19 + CD27 + CD38 +漿母細(xì)胞）進(jìn)行流式細(xì)胞儀表面染色。

顯示了每個目標(biāo)人群的頻率（B細(xì)胞的百分比）。

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