【前情提示】

[1] ELISpot常見問題匯總及Mabtech熱銷“Top 3”特色產(chǎn)品

[2] IFN-γ ELISpot法：有效評估疫苗引起的細胞免疫效應

說起ELISA人人都知道，它的“表兄弟”ELISpot你就不一定清楚了。

什么是ELISpot （統(tǒng)計能夠分泌某種蛋白的細胞的數(shù)量）？

酶聯(lián)免疫斑點法技術，ELISpot，是一種用于在單細胞水平上對分泌細胞因子或免疫球蛋白的細胞進行定量的靈敏分析方法。細胞分泌的細胞因子、免疫球蛋白或其他靶蛋白在分泌后立即被特異性抗體捕獲，并在整個刺激過程中被持續(xù)捕獲。ELISpot可以在25萬個細胞中檢測出一個有響應的細胞，是最靈敏的細胞分析方法之一。該檢測方法穩(wěn)健且易于操作，因此既適用于大規(guī)模試驗，也適用于實用研究。ELISpot已被廣泛應用于研究感染性疾病、癌癥、過敏和自身免疫性疾病的特異性免疫反應，以及特別熱門的新冠病毒疫苗開發(fā)領域。

ELISpot實驗步驟與原理示意 （示意圖如下）？

大致原理上分為如下7個步驟，詳情已具體產(chǎn)品說明書為準

Step.1 包被：將單克隆捕獲抗體添加到乙醇處理的PVDF膜板上

Step.2 細胞孵育：在有刺激的情況下加入細胞，孵育，細胞分泌細胞因子

Step.3 捕獲分泌物：激活后的細胞，分泌的細胞因子被周圍的抗體結合捕獲

Step.4 檢測抗體：去除細胞，清洗平板，加入生物素化的檢測抗體

Step.5 鏈霉親和素-酶偶聯(lián)物：加入鏈霉親和素偶聯(lián)物，保證后續(xù)在膜上形成斑點

Step.6 加反應底物：當酶催化時，顯色底物形成不溶性沉淀

Step.7 結果分析：在自動點閱讀器中對結果進行分析。每個斑點對應一個

分析物分泌細胞

ELISpot通常用于哪些領域呢？

ELISpot常見的領域包括：T細胞/B細胞功能研究、自身免疫檢測、器官移植、疫苗和藥品的研發(fā)與檢測、腫瘤研究、傳染病的研究和檢測、病毒研究等。下面簡單講述一下T細胞，B細胞的ELISpot分析應用：

T細胞的ELISpot

ELISpot是研究特異性免疫反應的敏感方法，能夠區(qū)分活化的T細胞亞群。例如，Th1細胞產(chǎn)生干擾素-γ、IL-2和TNF-α，而Th2細胞產(chǎn)生其他細胞因子，如IL-4、IL-5和IL-13。例如，這被廣泛應用于傳染病、癌癥、過敏和自身免疫性疾病的研究。

在疫苗研究中，ELISpot是一種標準工具，用于通過測量激發(fā)強大T細胞反應的能力(通常是干擾素-γ的分泌)來確定疫苗的有效性。今天，基于ELISpot的診斷分析已經(jīng)可用，包括一種通過測量T細胞對結核分枝桿菌特定抗原的反應分泌干擾素-γ來檢測結核病感染患者的測試。

人干擾素γ（ IFN-γ） ELISpot：分別在無刺激，抗CD3，植物血凝素（PHA）和純化蛋白衍生物

（PPD）孵育過夜條件下，檢測分析外周血單核細胞（PBMC）分泌IFN-γ情況。

B細胞的ELISpot

B細胞ELISpot分析是分析抗體免疫反應的有力工具，并且是僅有的少數(shù)能直接聚焦于 抗體分泌細胞（ASC）的分析方法之一。 這種極為靈敏的方法使研究人員能夠識別樣 品中的ASC，并測量其總數(shù)以及那些對特定抗原分泌抗體的數(shù)量。

例如，B細胞ELISpot可以揭示血液中長期記憶B細胞的數(shù)量，這是無法用其他方法評 估的。B細胞ELISpot的主要應用包括檢測B細胞對感染的反應和疫苗引發(fā)的反應。

人 IgG 和 IgA ELISpot ：用Pandemrix接種前后，收集PBMC，并通過ELISpot分析甲型流感病毒

（H1N1）特異性IgG（左） 和IgA（右）的分泌情況

如何挑選合適的ELISpot產(chǎn)品呢？

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* 以上產(chǎn)品僅適用于科學研究使用.

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