小G蛋白的共同特點(diǎn)是，當(dāng)結(jié)合了GTP時即成為活化形式，這時可作用于下游分子使之活化，而當(dāng)GTP水解成為GDP時（自身為GTP酶）則恢復(fù)到非活化狀態(tài)（分子開關(guān)），正常情況下，在細(xì)胞中，小G蛋白會在跟GDP結(jié)合的“關(guān)閉狀態(tài)”和 GTP 結(jié)合的“開啟狀態(tài)”之間循環(huán)，這種循環(huán)過程主要由細(xì)胞內(nèi)的小G蛋白調(diào)節(jié)因子來控制，胞內(nèi)小G蛋白調(diào)節(jié)因子主要有兩類：一類是可以增強(qiáng)小G蛋白的活性的鳥苷酸交換因子（guanine nucleotide exchange factor, GEF），另一類是可以降低小G蛋白活性的GTP酶活化蛋白（GTPase activating protein, GAP）。

今天我們就主要來聊一聊小G蛋白活性增強(qiáng)劑——鳥苷酸交換因子（GEF），GEF 是通過催化其目標(biāo) GTPase上的核苷酸交換來發(fā)揮作用，GEF與核苷酸結(jié)合的 GTPase 結(jié)合，這會導(dǎo)致結(jié)合的核苷酸被釋放，從而產(chǎn)生不含核苷酸的GEF-GTPase 反應(yīng)中間體。這種不含核苷酸的復(fù)合物隨后將結(jié)合新的核苷酸，然后GEF再從GTPase 中釋放出來。

由于GEFs對GDP-GTPases的親和力高于對相應(yīng)GTP-GTPases的親和力，在正常細(xì)胞中GTP和GDP比率約為10:1，GEFs將推動從GDP-GTPases到GTP-GTPases的轉(zhuǎn)換。

在這里小艾給大家?guī)硪豢瞠?dú)一無二的GEF活性檢測試劑盒，這是一款基于熒光法的檢測GTP酶上的核苷酸轉(zhuǎn)換的試劑盒，可適用于常規(guī)的96孔格式或高通量384孔格式。

該試劑盒包含檢測所需的所有試劑：

1.Exchange Buffer

2.His標(biāo)簽 Cdc42蛋白

3.His標(biāo)簽 Rac1 蛋白

4.His標(biāo)簽 RhoA 蛋白

5.His標(biāo)簽 hDbs 蛋白（作為 Cdc42 和 RhoA 的GEF的陽性對照 ）

6.黑色384孔板

7.黑色96孔板

檢測原理：該試劑盒是通過檢測熒光核苷酸類似物 N-甲基鄰氨基苯甲酰-GTP（mant-GTP）對 GTPase 的結(jié)合情況來檢測GEF的活性的。一旦mant-GTP與 GTPase 結(jié)合， mant-GTP的熒光強(qiáng)度（Ex：360 nm，Em：440 nm）顯著增加，通過檢測游離的mant-GTP和GTPase 結(jié)合的 mant-GTP 之間的熒光值差異，即可檢測樣本中GEF的活性。

本試劑盒的主要用途和應(yīng)用:

1. 測定未知GEFs活性；

2. 小GTPases及其相關(guān)GEFs的生化特性表征；

3. 研究不同輔助因子或蛋白結(jié)構(gòu)域?qū)EF活性的調(diào)控；

4. 篩選GEFs或GTPases突變蛋白的活性和底物特異性；

5. HTS(高通量篩選)篩選鑒定GEF抑制劑。

檢測結(jié)果展示：

產(chǎn)品推薦：

其他相關(guān)產(chǎn)品推薦：

用BK100發(fā)表的部分引文賞析：

1.Eshraghi, M. et al. RasGRP1 is a causal factor in the development of l-DOPA-induced dyskinesia in Parkinson’s disease. Sci. Adv. 6, eaaz7001 (2020).

2.Miao, H., Vanderleest, T. E., Jewett, C. E., Loerke, D. & Todd Blankenship, J. Cell ratcheting through the Sbf RabGEF directs force balancing and stepped apical constriction. J. Cell Biol. 218, 3845–3860 (2019).

3.Singh, N. K., Janjanam, J. & Rao, G. N. P115 RhoGEF activates the Rac1 GTPase signaling cascade in MCP1 chemokine-induced vascular smooth muscle cell migration and proliferation. J. Biol. Chem. 292, 14080–14091 (2017).

4.Rosenberg, B. J. et al. Phosphorylated cortactin recruits Vav2 guanine nucleotide exchange factor to activate Rac3 and promote invadopodial function in invasive breast cancer cells. Mol. Biol. Cell 28, 1347–1360 (2017).

5.Moey et al., 2011. Ginseng (Panax quinquefolius) attenuates leptin-induced cardiac hypertrophy through inhibition of p115RhoGEF-RhoA/ROCKdependent MAPK pathway activation.  Pharmacol. Exp. Ther. doi:10.1124/jpet.111.182600.

6.Oliver et al., 2011. The HPV16 E6 binding protein Tip-1 interacts with ARHGEF16, which activates Cdc42.  J. Cancer. 104, 324-331.

7.Guilluy et al., 2010. The Rho exchange factor Arhgef1 mediates the effects of angiotensin II on vascular tone and blood pressure.  Med. 16, 183-190.

8.Arbeloa et al., 2010. EspM2 is a RhoA guanine nucleotide exchange factor.  Microbiol. 12, 654-664.

9。Kim et al., 2009. Dipeptidyl Peptidase IV Inhibition With MK0431 Improves Islet Graft Survival in Diabetic NOD Mice Partially via T-Cell Modulation. Diabetes. 58, 641-651.

10.Li et al., 2009. PLC-gamma1 and Rac1 Coregulate EGF-Induced Cytoskeleton Remodeling and Cell Migration.  Endocrinol. 23, 901-913.

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