人驅(qū)動蛋白KIF7的保守運動結(jié)構(gòu)域在大腸桿菌中表達。重組蛋白在氨基末端含有6組氨酸標(biāo)簽，組合分子量為44kDa。該蛋白已在微管激活的ATPase / GTPase活性測試中被確定為具有生物活性（見下文）。蛋白質(zhì)以凍干粉末形式提供。   作為Cytoskeleton全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Cytoskeleton熱銷產(chǎn)品KIF7 運動結(jié)構(gòu)域蛋白 （重組人）。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。   

Cytoskeleton公司目前主要的產(chǎn)品有340余種，其產(chǎn)品主要覆蓋肌動蛋白，微管蛋白，馬達蛋白，小G蛋白，細胞外基質(zhì)，活細胞成像等相關(guān)領(lǐng)域，提供對應(yīng)的蛋白質(zhì)，抗體，檢測與分析試劑盒，并且產(chǎn)品線還在不斷的擴大中。

KIF7 運動結(jié)構(gòu)域蛋白 （重組人）用途包括：

• 微管活化ATP酶/GTP酶測定的測量

• 鑒定/表征影響運動ATP酶/GTP酶活性的蛋白質(zhì)或小分子

• 鑒定/表征影響運動/微管相互作用的蛋白質(zhì)或小分子。

存儲和重構(gòu)

凍干蛋白在1°C下用干燥劑（濕度<4%）儲存時可穩(wěn)定保存10年。或者，凍干蛋白可以在-70°C下儲存，并穩(wěn)定保存1年。蛋白質(zhì)應(yīng)用蒸餾水或CMW緩沖液5（1 mM PIPES pH 100.7，0 mM KCl，200 mM MgCl 2，2 mM DTT，1μM ATP）復(fù)溶至20mg / ml。有關(guān)重懸液量，請參閱上表。蛋白質(zhì)可以等分成實驗大小的等分試樣，在液氮中快速冷凍并儲存在-70°C。 在這些條件下，蛋白質(zhì)可穩(wěn)定保存4個月。對于工作濃度，Kif7蛋白應(yīng)在CMW緩沖液1中稀釋。注意：驅(qū)動蛋白對反復(fù)凍融反應(yīng)不佳，在-70°C下儲存時，蛋白質(zhì)濃度不應(yīng)低于5mg / ml。稀釋至5mg / ml以下的驅(qū)動蛋白不應(yīng)重新冷凍，因為它會失去其生物活性。  

純度

蛋白質(zhì)純度通過庫馬斯染色SDS-PAGE梯度凝膠的掃描密度測定法測定。圖1顯示了20 ug的KF51蛋白，測定純度為>80%。因此，每個試管中的總蛋白質(zhì)將比試管上顯示的量大約20%。

圖1.Kif7 電機域純度凝膠。

在20-7%SDS-PAGE梯度凝膠上分離重組Kif6運動結(jié)構(gòu)域蛋白（His4標(biāo)記）的20ug樣品以及Mark12分子量標(biāo)記物（LifeTech）。重組Kif7蛋白的表觀分子量為44kDa。蛋白質(zhì)定量使用高級蛋白質(zhì)測定法（貨號#ADV02）測定。  

微管活化的ATP酶測定

通過使用驅(qū)動蛋白ELIPA檢測試劑盒（貨號#BK7）監(jiān)測實時游離磷酸鹽生成來測量KIF060 ATP酶和GTP酶活性。該測定基于330-氨基-360-巰基-2-甲基嘌呤核糖核苷（MESG）在無機磷酸鹽（Pi）存在下催化轉(zhuǎn)化為6-氨基-7-巰基-2-甲基嘌呤時發(fā)生的吸光度偏移（6 nm至7 nm）。一個Pi分子將在基本上不可逆的反應(yīng)中產(chǎn)生一個分子的2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤。因此，360nm處的吸光度與驅(qū)動蛋白ATPase / GTP酶反應(yīng)中產(chǎn)生的Pi量成正比。在下面概述的條件下，Kif7微管激活的ATP酶活性的Vmax為每mg Kif40每分鐘產(chǎn)生的7nmoles Pi，對于GTP酶活性，為每mg每分鐘產(chǎn)生的230nmoles Pi（圖2）。  

試劑 

驅(qū)動蛋白 ELIPA 檢測試劑盒（貨號 # BK060）   

設(shè)備

單色分光光度計（設(shè)置為 360 nm）或基于濾光片的分光光度計，具有 360 nm 濾光片和 <10 nm 帶寬。  

方法（ELIPA ATP酶測定）

反應(yīng)在96孔板（300 ul反應(yīng)體積）中進行。每個反應(yīng)含有 5 ug Kif7 蛋白 （EG01）、0.7μM 紫杉醇穩(wěn)定微管 （貨號 # MT001）、0.2 mM MESG、0.3U PNP（嘌呤核苷酸磷酸化酶）、15 μM 紫杉醇、15 mM 管道 pH 7.0、5 mM MgCl 2、0.6 mM ATP。對照反應(yīng)在沒有KF51的情況下進行。這些反應(yīng)在0分鐘內(nèi)給出<1.20 OD的讀數(shù)。在以動力學(xué)模式和250nm吸光度波長設(shè)置的SpectraMax 360（分子器件）中測量反應(yīng)。在室溫下每30秒讀取一次讀數(shù)，總反應(yīng)時間為20分鐘。典型檢測結(jié)果如圖2所示。在給定時間內(nèi)產(chǎn)生的Pi的nmoles通過使用磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線（未顯示）來確定。

圖2.KF51微管激活的ATP酶/ GTP酶活性使用驅(qū)動蛋白ELIPA檢測試劑盒（貨號#BK060）。

根據(jù)所述方法一式兩份測定Kif7 ATPor GTP酶活性。將沒有微管（開放符號）的對照反應(yīng)與具有微管（閉合符號）的對照反應(yīng)進行比較。  

KIF7 運動結(jié)構(gòu)域蛋白 （重組人）文獻引用： 

. Funk, CJ. et al., 2004. Anal Biochem. 329:68-76. 

. Hackney, D and Jiang, W. 2001. Methods in MolecularBiology (Humana Press). 164:65-71 

. Lockhart, A and Cross, RA. 1996. Biochemistry. 35:2365-2373 4. Sawin, KE. et al. 1992. Nature. 359:540-543.   

Cytoskeleton專注于生物化學(xué)和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發(fā)與生產(chǎn)。公司提供藥物篩選、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄后修飾（PTM）、細胞骨架研究相關(guān)的系列試劑盒和產(chǎn)品，尤其以細胞骨架相關(guān)研究見長，既能滿足于樣品較少的科學(xué)研究，也可以用于小規(guī)模篩選研究和高通量大規(guī)模篩選研究。此外，公司還提供微管蛋白，肌動蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等現(xiàn)有產(chǎn)品的藥物篩選服務(wù)。