【前情回顧】：神奇的熒光素酶（一），知否知否

作為報(bào)告基因，熒光蛋白（如綠色熒光蛋白（GFP）及其變體紅色熒光蛋白（RFP）和黃色熒光蛋白（YFP）或者生物熒光素酶（如螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase，F(xiàn)luc）海參熒光素酶（Renilla luciferase，Rluc））已成為研究基因調(diào)控、抗癌藥物活性考察、基因突變分析、生物成像、DNA雜交分析及實(shí)時(shí)監(jiān)測腫瘤發(fā)生發(fā)展情況等生物過程的潛在有效分析工具。但GFP等熒光蛋白的靈敏性相比于熒光素酶要低很多，而且GFP在細(xì)胞內(nèi)容易累積，使其不適合實(shí)時(shí)監(jiān)測。現(xiàn)有的生物熒光素酶中，F(xiàn)luc發(fā)光時(shí)需要輔助因子ATP和Mg²⁺，Rluc雖然不依賴于ATP和Mg²⁺等輔助因子，但光子產(chǎn)量較低，另外Fluc和Rluc均不能分泌表達(dá)，監(jiān)測酶活性時(shí)需要裂解細(xì)胞，操作繁瑣且不能實(shí)現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的連續(xù)觀察。

近年，發(fā)現(xiàn)的一種來源于海洋橈腳類動(dòng)物Gaussia princeps的Gaussia 分泌型熒光素酶是體內(nèi)已知最小的可自然分泌的熒光素酶。因其可分泌、易于監(jiān)測、靈敏度過、半衰期短、可進(jìn)行活細(xì)胞或生物體實(shí)時(shí)監(jiān)測等特性，在研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白定位、小干擾RNA（siRNA）沉默技術(shù)、腫瘤模型藥物治療評(píng)價(jià)、監(jiān)測啟動(dòng)子活性、實(shí)時(shí)監(jiān)測腫瘤發(fā)生發(fā)展情況和高通量藥物篩選等中得到廣泛應(yīng)用。通過報(bào)告基因載體，Gaussia可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)。表達(dá)后的Gaussia為單條肽鏈的單體酶，其分子較小（185aa），且具有分泌性信號(hào)肽，因此可通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌到細(xì)胞外。該熒光素梅催化底物腔腸素的氧化反應(yīng)并且發(fā)光（480nm），該反應(yīng)無需ATP參與。

與其他熒光素酶相比，使用Gaussia 作為報(bào)告基因有更多的優(yōu)勢：

        1. 分泌型熒光素酶，可直接取上清檢測，無須裂解細(xì)胞；        2. 發(fā)光強(qiáng)度高，是其它熒光素酶的1千倍；        3. 反應(yīng)無須ATP，不受ATP影響；        4. 穩(wěn)定性高，對(duì)溫度、PH值等耐受性強(qiáng)。

分泌型堿性磷酸酶（secreted alkaline phos-phatase，SEAP）是人胎盤堿性磷酸酶的突變體，最大特點(diǎn)是能由表達(dá)細(xì)胞分泌到細(xì)胞外，檢測時(shí)可在不破壞細(xì)胞的情況下，任意時(shí)間點(diǎn)取細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行重復(fù)、動(dòng)態(tài)的檢測，常作為熒光素酶檢測過程中信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。

GeneCopoeia 提供預(yù)制和定制的 GLuc-ON™ 啟動(dòng)子克隆，包括單報(bào)告基因載體系統(tǒng)和雙報(bào)告基因載體系統(tǒng)。單報(bào)告基因載體系統(tǒng)以 Gluc 作為啟動(dòng)子的報(bào)告基因；雙報(bào)告基因載體系統(tǒng)以 Gluc 作為啟動(dòng)子報(bào)告基因，以SEAP作為信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參，可在活細(xì)胞中對(duì)超過 20,000 種人和 18,000 種小鼠啟動(dòng)子進(jìn)行實(shí)時(shí)活性分析。

分泌型雙熒光素酶檢測試劑盒

        Secrete-Pair^TM Dual Luminescence Assay Kit用于檢測雙報(bào)告系統(tǒng)中 Gluc 和SEAP的活性。Gluc 和SEAP都是分泌型蛋白，無需裂解細(xì)胞就能從培養(yǎng)基中獲得實(shí)驗(yàn)樣本。

分泌型單熒光素酶檢測試劑盒

熒光素酶報(bào)告基因載體：

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