該操作以 Invitrogen 公司的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑 LipofectAMINE 為例，其它轉(zhuǎn)染試劑可參照各自的使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.在 6 孔板中接種 1-3×105 細(xì)胞/孔，加入 2ml 完全培養(yǎng)基，置CO2 孵箱中 37℃培養(yǎng)過(guò)夜。

2. 待細(xì)胞長(zhǎng)到 50-80%單層時(shí)，在無(wú)菌離心管中配制如下溶液：

i.

溶液 A：將 1-2ug待轉(zhuǎn)染的超純 DNA 稀釋到 100ul無(wú)血清培養(yǎng)基中

ii.

溶液 B：將 2-25ul LipofectAMINE 稀釋到 100μul無(wú)血清培養(yǎng)基中

3. 混合溶液 A 和 B，輕輕混勻，室溫放置 15-45min。

4. 用 2ml 無(wú)血清培養(yǎng)基輕輕洗滌細(xì)胞，加入 0.8ml 無(wú)血清培養(yǎng)基/孔，將脂質(zhì)體復(fù)合物滴加到孔中，輕輕搖晃混勻，置 CO2 孵箱中 37℃孵育 2-24hr。

5. 用完全培養(yǎng)基替換轉(zhuǎn)染液，繼續(xù)培養(yǎng)。

6. 24-72hr 后檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩(wěn)定表達(dá)株。