1．確定抗生素作用的最佳濃度：

不同的細(xì)胞株對(duì)各種抗生素有不同的敏感性，因此在篩選前要做預(yù)試驗(yàn)，確定抗生素對(duì)所選擇細(xì)胞的最低作用濃度。

1)提前 24 小時(shí)在 96 孔板或 24 孔板中接種細(xì)胞 8 孔，接種量以第二天長(zhǎng)成25%單層為宜，置 CO2孵箱中 37℃培養(yǎng)過(guò)夜。

2)將培養(yǎng)液換成含抗生素的培養(yǎng)基，抗生素濃度按梯度遞增（0, 50, 100, 200,400, 600, 800 和1000μg/ml）。
3)培養(yǎng) 10-14 天以絕大部分細(xì)胞死亡濃度為準(zhǔn),一般為 400-800μg/ml,篩選穩(wěn)定表達(dá)克隆時(shí)可比該濃度適當(dāng)提高一個(gè)級(jí)別維持時(shí)使用篩選濃度的一半.

2．轉(zhuǎn)染按前面的步驟進(jìn)行。

3．轉(zhuǎn)染 72 小時(shí)后按 1:10 的比例將轉(zhuǎn)染細(xì)胞在 6 孔板中傳代，換為含預(yù)試驗(yàn)中確定的抗生素濃度的選擇培養(yǎng)基。在6 孔板內(nèi)可見(jiàn)單個(gè)細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)可見(jiàn)單個(gè)細(xì)胞分裂繁殖形成單個(gè)抗性集落，此時(shí)可用兩種方法挑選單克隆。

1) 濾紙片法：用消毒的 5x5mm 濾紙片浸過(guò)胰酶,將濾紙片貼在單細(xì)胞集落上10-15 秒，取出 粘附有細(xì)胞的濾紙片放于 24 孔板中繼續(xù)加壓培養(yǎng)。細(xì)胞在24 孔板中長(zhǎng)滿后轉(zhuǎn)入 25cm2培養(yǎng)瓶中,長(zhǎng)滿后再轉(zhuǎn)入 75cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)

2) 有限稀釋法：將細(xì)胞消化下來(lái)后做連續(xù)的 10 倍稀釋（10-2—10-10），將每一稀釋度的細(xì)胞滴加到 96 孔板中培養(yǎng)，7-10 天后，選擇單個(gè)克隆生長(zhǎng)的孔再一次進(jìn)行克隆。
4. ELISA 或 Western blot 檢測(cè)單克隆細(xì)胞中外源蛋白的表達(dá)情況由于不同克隆的表達(dá)水平存在差異因此可同時(shí)挑選多個(gè)克隆選擇表達(dá)量最高的克隆傳代并保種。