相信很多童鞋在PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中飽受過(guò)引物二聚體折磨。引物二聚體作為 PCR 的副產(chǎn)物，甚至有時(shí)候是主要產(chǎn)物充斥著我們的整個(gè) PCR 實(shí)驗(yàn)過(guò)程。而消除引物二聚體是必須要去學(xué)會(huì)的，下面呆大家去了解引物二聚體，認(rèn)識(shí)它，最后消除它。

引物二聚體是什么？

引物二聚體其實(shí)就是一對(duì)引物或者引物自身的 3’ 端部分堿基互補(bǔ)結(jié)合，在 Taq 酶的作用下從 3’ 末端延伸所形成的小分子量的雙鏈 DNA 片段。

2、引物二聚體是如何形成的？

a、最根本的原因是引物之間或者引物自身 3’ 端部分堿基互補(bǔ)結(jié)合

b、模板量過(guò)低

c、引物濃度過(guò)大

d、引物長(zhǎng)度過(guò)短

e、退火溫度低

f、循環(huán)次數(shù)過(guò)高

3、如何區(qū)分引物二聚體和目的條帶？

因?yàn)橐锒垠w的大小從幾十 bp 至幾百 bp 不等，所以當(dāng)你的目的條帶的分子量比較小的時(shí)候，電泳后所看到的結(jié)果不一定是目的條帶，很有可能是引物二聚體，所以我們需要一個(gè)有效的方法來(lái)區(qū)分二者。當(dāng)我們對(duì)引物二聚體形成的本質(zhì)了解了之后，想要區(qū)分二者其實(shí)并不難，我相信大家看到這里的時(shí)候已經(jīng)知道了引物二聚體形成的本質(zhì)了，但是我還要強(qiáng)調(diào)一遍：引物二聚體形成的本質(zhì)其實(shí)就是引物之間或者引物自身的 3’ 端區(qū)域存在部分互補(bǔ)結(jié)合。

也就是說(shuō)，引物的形成是不需要模板的參與的，所以我們只需要在電泳的時(shí)候添加一組對(duì)照就可以有效的判斷是否有引物二聚體的形成，以及如果有引物二聚體的形成，它的分子量是多大，從而區(qū)分開(kāi)引物二聚體和目的產(chǎn)物。

這個(gè)對(duì)照就是：模板用 H2O 替代，其他的都一樣。這樣的話，如果這個(gè)泳道有條帶出現(xiàn)，那說(shuō)明形成了引物二聚體（當(dāng)然前提就是該體系沒(méi)有被模板污染）。從這里也可以看出設(shè)置對(duì)照的重要性，一個(gè)巧妙的對(duì)照往往可以達(dá)到事半功倍的效果。

4、如何消除引物二聚體？

a、重新設(shè)計(jì)引物，這是解決該問(wèn)題最根本的辦法

b、增加模板用量

c、減小引物濃度

d、引物長(zhǎng)度適中

e、提高退火溫度

f、減少循環(huán)次數(shù)

g、可以適當(dāng)?shù)脑?Mix 中添加少量的甘油或 DMSO。

童鞋們get了這些了么，快去實(shí)操起來(lái)。更多相關(guān)問(wèn)題歡迎下方留言給我們。