PBS，三乙醇胺緩沖液(TBS) 和三乙醇胺-吐溫(TBS Tween) 緩沖液的配制

PBS (10x)

80g 氯化鈉

2.0g 氯化鉀

14.4g 磷酸氫二鈉

2.4g 磷酸二氫鉀

加入800ml 超純水，混勻，用純鹽酸調(diào)節(jié)pH 值至7.4，然后加入超純水至1L。

10倍三乙醇胺緩沖液

24.23g 氨基丁三醇氯化氫

80.06g 氯化鈉

加入800ml 超純水，混勻，用純鹽酸調(diào)節(jié)pH 值至7.6，然后加入超純水至1L。

三乙醇胺-吐溫緩沖液（含0.1% 的吐溫20）

配制1L 溶液：取100ml 10 倍三乙醇胺緩沖液加890ml 超純水，再加入10ml 吐溫20 (10%)

吐溫20 很粘稠會(huì)粘在量取的槍頭上，要確定加入三乙醇胺緩沖液的變性劑體積足夠。建議使用10% 的溶液進(jìn)行配制，這樣會(huì)比用未稀釋
的吐溫20 溶液容易配制。

蛋白質(zhì)印跡

裂解液

這些緩沖液可保存于4°C 幾周，分裝后凍存于-20°C 可以保存一年。

乙基苯基聚乙二醇（NP-40）緩沖液

150mM 氯化鈉

1.0% 乙基苯基聚乙二醇（也可用0.1% 聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100) 代替）

50mM 三羥甲基氨基甲烷-氯化氫(Tris-HCl)，pH 值8.0

蛋白酶抑制劑

RIPA緩沖液（放射免疫沉淀測(cè)定緩沖液）

150mM 氯化鈉

1.0% 乙基苯基聚乙二醇或0.1% 聚乙二醇辛基苯基醚

0.5% 去氧膽酸鈉

0.1% SDS（十二烷基硫酸鈉）

50mM 三羥甲基氨基甲烷-氯化氫，pH 值8.0

蛋白酶抑制劑

RIPA 緩沖液的變性能力要強(qiáng)于乙基苯基聚乙二醇或聚乙二醇辛基苯基醚，因其活性成分包含了離子型去垢劑SDS 和去氧膽酸鈉，在核膜降解和細(xì)胞核提取時(shí)非常有用。RIPA 緩沖液產(chǎn)生的背景很低，但其也可使蛋白酶變性。

10% 的去氧膽酸鈉儲(chǔ)存液（5 克溶于50ml）必須避光保存。

三羥甲基氨基甲烷-氯化氫緩沖液

20mM 三羥甲基氨基甲烷-氯化氫，pH 值7.5

蛋白酶抑制劑

三羥甲基氨基甲烷-聚乙二醇辛基苯基醚緩沖液（用于細(xì)胞骨架蛋白）

10mM 三羥甲基氨基甲烷，pH 值7.4

100mM 氯化鈉

1mM 乙二胺四乙酸

1mM 乙二醇雙(2-氨基乙醚)四乙酸

1% 聚乙二醇辛基苯基醚

10% 甘油

0.1% 十二烷基硫酸鈉

0.5% 去氧膽酸鈉

蛋白酶抑制劑

10% 的去氧膽酸鈉儲(chǔ)存液（5 克溶于50ml）必須避光保存。

非變性裂解緩沖液

20mM 三羥甲基氨基甲烷-氯化氫，pH 值8.0

137mM 氯化鈉

10% 甘油

1% 乙基苯基聚乙二醇/聚乙二醇辛基苯基醚

2mM 乙二胺四乙酸

蛋白酶抑制劑

（用于可溶于變性劑的抗原，其天然型被相應(yīng)抗體識(shí)別。聚乙二醇辛基苯基醚可替代乙基苯基聚乙二醇無(wú)去垢劑型可溶蛋白裂解液）

5mM 乙二胺四乙酸

0.02% 疊氮化納

磷酸鹽緩沖液

蛋白酶抑制劑

一些可溶性蛋白不需要使用去垢劑。此緩沖液可用于機(jī)械裂解細(xì)胞，如用注射器反復(fù)抽壓或用Dounce 勻漿機(jī)勻漿。

變性裂解液/用于不容于去垢劑的抗原的裂解液

1% 十二烷基硫酸鈉

5mM 乙二胺四乙酸

使用前加入：

10mM 的二硫蘇糖醇或β-巰基乙醇

蛋白酶抑制劑

15U/ml DNA 酶I

僅識(shí)別變性蛋白的抗體不會(huì)與天然型蛋白結(jié)合。在收集和裂解細(xì)胞時(shí)，要將重懸細(xì)胞的變性裂解緩沖液加熱。此方法也可用于非離子型去垢劑無(wú)法提取的抗原。使用DNA 酶I 有助于從染色質(zhì)中抽提蛋白。

電泳和印跡緩沖液

Laemmli 2 倍緩沖液/上樣緩沖液

4% 十二烷基硫酸鈉

10% 2-巰基乙醇

20% 甘油

0.004% 溴酚藍(lán)

0.125M 三羥甲基氨基甲烷-氯化氫

測(cè)定pH 值，調(diào)整pH 值至6.8

電泳緩沖液

25mM 三羥甲基氨基甲烷堿

190mM 甘氨酸

0.1% 十二烷基硫酸鈉

測(cè)定pH值，如有必要的話(huà)，調(diào)整pH 值至8.3

轉(zhuǎn)移緩沖液（濕式）

25mM 三羥甲基氨基甲烷堿

190mM 甘氨酸

20% 甲醇

如有必要的話(huà)，pH 值應(yīng)調(diào)節(jié)至8.3

大于80 kDa 的蛋白，建議十二烷基硫酸鈉終濃度為0.1%。

轉(zhuǎn)移緩沖液（半干式）

48mM 三羥甲基氨基甲烷

39mM 甘氨酸

20% 甲醇

0.04% 十二烷基硫酸鈉

封閉緩沖液

5% 牛奶或BSA（牛血清白蛋白）

加入三乙醇胺-吐溫緩沖液。充分混合后過(guò)濾。如不過(guò)濾會(huì)聚集成斑點(diǎn)，這種小暗點(diǎn)會(huì)在顯色時(shí)影響印跡的效果。