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TECHNICAL COLUMN
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固定緩沖液
福爾馬林(10%,中性緩沖液)
3.7-4% 甲醛(37-40%)
33mM 磷酸二氫鈉
46mM 磷酸氫二鈉(無水)
多聚甲醛(4%,中性緩沖液)
8% 的多聚甲醛
0.2M 磷酸鹽緩沖液(PBS),pH值7.4
53mM 磷酸二氫鈉
154mM 磷酸氫二鈉
8% 多聚甲醛溶液配制時應(yīng)60°C 加熱攪拌(溫度不要超過60°C)。溶液達到60°C 時多聚甲醛溶解,加入500ml 0.2mM 磷酸鹽緩沖液,使0.1mM 磷酸鹽緩沖液中含4% 多聚甲醛。小心滴加1 當(dāng)量的氫氧化鈉溶液直至溶液澄清(每500ml 滴加1 至2 滴;如果仍未澄清,可繼續(xù)滴加。或者,可在1 至2L 溶液中加入2 粒固體氫氧化鈉)。溶液變冷后過濾。
溶液的pH 值應(yīng)為7.4。不要用酸或堿來調(diào)節(jié)pH 值!如需要調(diào)節(jié),可另配制0.2 M 溶液來調(diào)節(jié),溶液可使用單堿或雙堿的磷酸鈉配制(視實際情況而定)。
(多聚甲醛應(yīng)新鮮配制。如4°C 過夜保存,第二天使用固定效果不如當(dāng)天配制的好。可以將多聚甲醛溶液-20°C 凍存,但為了結(jié)果的一致性,組織樣本要么都用新鮮配制的多聚甲醛固定,要么都用新鮮融解的多聚甲醛固定。)
Bouin 溶液(特別用于保存質(zhì)地軟、結(jié)構(gòu)精細的組織,如腦組織)
75ml 苦味酸(飽和的)
25ml 甲醛(37-40%)
5ml 冰乙酸
充分混合
抗原修復(fù)液
檸檬酸鈉緩沖液,pH 值6.0
10mM 檸檬酸鈉(二水枸櫞酸三鈉)
0.05% 吐溫20
混合溶解枸櫞酸鈉,用1N 鹽酸調(diào)節(jié)pH 值至6.0。
加入吐溫20 并充分混合。
室溫可保存3 個月,置于4°C 可保存更長時間。
三羥甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸緩沖液,pH 值9.0
10mM 三羥甲基氨基甲烷堿
1mM 乙二胺四乙酸
0.05% 吐溫20
混合溶解,調(diào)節(jié)pH 值至9.0。加入吐溫20 并充分混合。
室溫可保存3 個月,置于4°C 可保存更長時間。
含酶的抗原修改緩沖液:
胰蛋白酶儲液
0.5% 胰蛋白酶
蒸餾水融解后-20°C 凍存。
氯化鈣儲存液(1%)
1% 氯化鈣
蒸餾水融解后4°C 保存。
胰蛋白酶工作液
0.05% 胰蛋白酶(用0.5% 胰蛋白酶儲存液配制)
0.1% 氯化鈣(用1% 氯化鈣儲存液配制)
8ml 蒸餾水
蒸餾水融解,用1M 氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH 值至7.8
4°C 可保存3 個月,置于-20°C 可保存更長時間
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