原癌基因c-fos屬于立早基因（IEGS），可快速及短暫地在腦中表達 (Herrera and Robertson, 1996)。它可被多種刺激物誘導，通常用作神經元激活的標記物 (Morgan et al., 1987; Gaiddon et al., 1996; Chowdhury et al., 2000; Gallo et al., 2018; Wakhloo et al., 2020)。像許多其它立早基因一樣，c-Fos是一種轉錄因子。它與c-Jun結合為異質二聚體，結合到AP-1結合位點 （圖1），可增強許多參與增殖、分化、細胞凋亡或炎癥其它基因的表達  (Ye at al., 2014)。

圖1：異質二聚體bZIP轉錄因子c-Fos/c-Jun與DNA結合的圖例說明 （改編自Glover and Harrison, 1995 and PDB 1FOS）。

c-Fos試驗的關鍵技術參數(shù)：

動物處理：當計劃動物c-Fos試驗時，你應該意識到技術缺陷會影響到你的研究成果。例如，你應該考慮到c-Fos表達與時間有關，易受壓力影響，可在幾分鐘后就檢測到  (Herrera and Robertson, 1996)。重要的是要考慮到許多因素，如動物處理本身（例如針注射）或者在黑暗時期暴露于光下（節(jié)律激活）可影響c-Fos表達 (Asanuma and Ogawa, 1994; Herrera and Robertson, 1996)。因此，試驗必須精確計劃和實施，并須有合適的對照組，以避免假陽性結果。

IHC實驗方案：另一點你應該關心的是你的免疫組織化學（IHC）實驗方案。似乎c-Fos陽性細胞總數(shù)目取決于閾值。許多參數(shù)如：組織儲存條件、切片方法（低溫恒溫器或振動切片機）、染色參數(shù)（例如孵育溫度）、信號增強試劑，尤其是初級抗體的選擇都可影響c-Fos陽性細胞數(shù)目的檢測 (Berghorn et al., 1994; Werner et al., 1996; Mayer and Bendayan, 2001)。

c-Fos抗體：初級抗體間的特異性、敏感性和信噪比都不同，而這些特性會影響你試驗的結果。因此，我們的目標在于為科學研究和試驗重復性提供高特異性和一致性的c-Fos抗體。由于單克隆抗體與多克隆抗體相比擁有多種優(yōu)勢，因而我們開發(fā)了一種新的單克隆重組兔抗-c-Fos抗體。

單克隆重組c-Fos抗體的優(yōu)勢：

抗體共享一種由兩條重鏈和兩條輕鏈組成的常見結構（圖2）。所有重鏈和輕鏈包含物種特異性恒定區(qū)和負責目標識別的可變序列 (Davies and Metzger, 1983)。

圖2：抗體結構。抗體由兩條重鏈和兩條輕鏈組成。所有重鏈和輕鏈包含物種特異性恒定區(qū)和負責目標識別的可變序列。

單克隆抗體制劑源于一個已確定的雜交瘤細胞系，所有單獨的抗體分子都是完全相同的，并共享相同的抗原識別位點。相反，多克隆抗體如兔c-Fos抗體226 003由具有不同目標識別序列的抗體分子混合物組成。一旦血清用完，新的動物必須被免疫。獲得的新血清包含具有新特異性和親和特性的c-Fos抗體的新混合物，導致多克隆c-Fos抗體的實驗性能在批次間產生差異。

使用單克隆重組兔c-Fos抗體226 008 ，可長久的解決批次間差異的問題。對表現(xiàn)一直優(yōu)異的大鼠單克隆c-Fos抗體226 017的c-Fos目標識別域進行測序，并將其與兔免疫球蛋白G的抗體恒定區(qū)融合（圖3）。

圖3：單克隆重組兔c-Fos抗體的創(chuàng)建。為生成重組兔抗c-Fos抗體226 008，將單克隆大鼠抗- c-Fos抗體226 017的目標識別序列與兔特異性恒定抗體區(qū)域融合。

這種高度定義的單克隆重組抗體可在受控條件下作為無限資源在哺乳動物細胞中表達，且批次間差異Z小。它在我們的測試標準應用中表現(xiàn)卓越，等同于或甚至好于兔多克隆c-Fos批次（圖4）。多克隆兔抗c-Fos抗體226 003極易受試驗條件改變的影響（例如，IHC實驗中孵化溫度可影響信號強度），而單克隆重組兔抗c-Fos抗體226 008在不同試驗設置下染色結果依然穩(wěn)健，因此是你試驗的Z好選擇。

隨著時間推移，這種單克隆抗體將會被用于很多不同應用中，所有收集的信息都將有助于更好地描述此研究試劑。與多克隆抗體相反，這些信息不斷積累，永遠不會丟失，使這種研究試劑成為您手中越來越有價值和可靠的工具。

圖4：單克隆重組兔抗- c-Fos抗體226 008在所有的標準應用中都表現(xiàn)優(yōu)異。重組兔抗- c-Fos抗體226 008與單克隆大鼠抗c-Fos抗體226 017和多克隆兔抗c-Fos抗體226 003在相同試驗條件下相比。在IHC和IHC-P試驗中，c-Fos抗體可用于小鼠和大鼠海馬體切片的間接免疫染色（小鼠切片顯示；IHC：c-Fos = 紅色，DAPI = 藍色；IHC-P：c-Fos = 棕色，蘇木精 = 藍色）。在ICC試驗中，c-Fos抗體可用于大鼠海馬體神經元的間接免疫染色（c-Fos = 紅色，MAP 2 188 011/188 002 = 綠色，DAPI = 藍色）。在免疫印跡試驗中，c-Fos可從TPA刺激的HeLa細胞的核提取物中檢測到（檢測方法：AP染色）。

參考文獻：

Asanuma and Ogawa, 1994: Pitfalls in Assessment of c-fos mRNA Expression in the Brain: Effects of Animal Handling. PMID: 7827709

Berghorn et al., 1994: cFos Immunoreactivity Is Enhanced with Biotin Amplification. PMID: 7983364

Chowdhury et al., 2000: Induction and adaptation of Fos expression in the rat brain by two types of acute restraint stress. PMID: 10822158

Davies and Metzger, 1983: Structural basis of antibody function. PMID: 6399980

Gaiddon et al., 1996: Brain-derived neurotrophic factor stimulates AP-1 and cyclic AMP-responsive element dependent transcriptional activity in central nervous system neurons PMID: 8632149

Gallo et al., 2018: Immediate Early Genes, Memory and Psychiatric Disorders: Focus on c-Fos, Egr1 and Arc. PMID: 29755331

Glover and Harrison, 1995: Crystal structure of the heterodimeric bZIP transcription factor c-Fos-c-Jun bound to DNA. PMID: 7816143

Herrera and Robertson, 1996: Activation of c-fos in the brain. PMID: 8971979

Mayer and Bendayan, 2001: Amplification methods for the immunolocalization of rare molecules in cells and tissues. PMID: 11194866

Morgan et al., 1987: Mapping Patterns of c-fos Expression in the Central Nervous System After Seizure. PMID: 3037702

Sheng and Greenberg, 1990: The Regulation and Function of c-fos and Other Immediate Early Genes in the Nervous System. PMID: 1969743

Wakhloo et al., 2020: Functional hypoxia drives neuroplasticity and neurogenesis via brain erythropoietin. PMID: 32152318

Werner et al. 1996, Antigen retrieval, signal amplification and intensification in immunohistochemistry. PMID: 9072182

Ye et al., 2014: Small Molecule Inhibitors Targeting Activator Protein 1 (AP-1). PMID: 24831826

Synaptic Systems（SySy）品牌成立于德國，專注于研發(fā)和生產針對突觸和神經科學相關抗體，以及用于細胞生物學、組織病理學和高分辨率顯微鏡的各種抗體，除此之外，還推出與SySy抗體配套使用的試劑盒、試劑等產品組合，全方面滿足客戶的各種需求。抗體產品線主要有：突觸活性區(qū)域相關抗體、突觸后蛋白相關抗體、RNA修飾如m6A抗體、突觸粘附蛋白抗體、SNARE相關抗體、Alzheimer's相關抗體、細胞骨架、離子通道相關抗體等。該品牌產品專業(yè)且質量好，在國內外備受好評。作為SySy在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的SySy產品。