原癌基因c-fos屬于立早基因（IEGS），可快速及短暫地在腦中表達(dá) (Herrera and Robertson, 1996)。它可被多種刺激物誘導(dǎo)，通常用作神經(jīng)元激活的標(biāo)記物 (Morgan et al., 1987; Gaiddon et al., 1996; Chowdhury et al., 2000; Gallo et al., 2018; Wakhloo et al., 2020)。像許多其它立早基因一樣，c-Fos是一種轉(zhuǎn)錄因子。它與c-Jun結(jié)合為異質(zhì)二聚體，結(jié)合到AP-1結(jié)合位點(diǎn) （圖1），可增強(qiáng)許多參與增殖、分化、細(xì)胞凋亡或炎癥其它基因的表達(dá)  (Ye at al., 2014)。

圖1：異質(zhì)二聚體bZIP轉(zhuǎn)錄因子c-Fos/c-Jun與DNA結(jié)合的圖例說明 （改編自Glover and Harrison, 1995 and PDB 1FOS）。

c-Fos試驗(yàn)的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)：

動(dòng)物處理：當(dāng)計(jì)劃動(dòng)物c-Fos試驗(yàn)時(shí)，你應(yīng)該意識(shí)到技術(shù)缺陷會(huì)影響到你的研究成果。例如，你應(yīng)該考慮到c-Fos表達(dá)與時(shí)間有關(guān)，易受壓力影響，可在幾分鐘后就檢測到  (Herrera and Robertson, 1996)。重要的是要考慮到許多因素，如動(dòng)物處理本身（例如針注射）或者在黑暗時(shí)期暴露于光下（節(jié)律激活）可影響c-Fos表達(dá) (Asanuma and Ogawa, 1994; Herrera and Robertson, 1996)。因此，試驗(yàn)必須精確計(jì)劃和實(shí)施，并須有合適的對(duì)照組，以避免假陽性結(jié)果。

IHC實(shí)驗(yàn)方案：另一點(diǎn)你應(yīng)該關(guān)心的是你的免疫組織化學(xué)（IHC）實(shí)驗(yàn)方案。似乎c-Fos陽性細(xì)胞總數(shù)目取決于閾值。許多參數(shù)如：組織儲(chǔ)存條件、切片方法（低溫恒溫器或振動(dòng)切片機(jī)）、染色參數(shù)（例如孵育溫度）、信號(hào)增強(qiáng)試劑，尤其是初級(jí)抗體的選擇都可影響c-Fos陽性細(xì)胞數(shù)目的檢測 (Berghorn et al., 1994; Werner et al., 1996; Mayer and Bendayan, 2001)。

c-Fos抗體：初級(jí)抗體間的特異性、敏感性和信噪比都不同，而這些特性會(huì)影響你試驗(yàn)的結(jié)果。因此，我們的目標(biāo)在于為科學(xué)研究和試驗(yàn)重復(fù)性提供高特異性和一致性的c-Fos抗體。由于單克隆抗體與多克隆抗體相比擁有多種優(yōu)勢，因而我們開發(fā)了一種新的單克隆重組兔抗-c-Fos抗體。

單克隆重組c-Fos抗體的優(yōu)勢：

抗體共享一種由兩條重鏈和兩條輕鏈組成的常見結(jié)構(gòu)（圖2）。所有重鏈和輕鏈包含物種特異性恒定區(qū)和負(fù)責(zé)目標(biāo)識(shí)別的可變序列 (Davies and Metzger, 1983)。

圖2：抗體結(jié)構(gòu)。抗體由兩條重鏈和兩條輕鏈組成。所有重鏈和輕鏈包含物種特異性恒定區(qū)和負(fù)責(zé)目標(biāo)識(shí)別的可變序列。

單克隆抗體制劑源于一個(gè)已確定的雜交瘤細(xì)胞系，所有單獨(dú)的抗體分子都是完全相同的，并共享相同的抗原識(shí)別位點(diǎn)。相反，多克隆抗體如兔c-Fos抗體226 003由具有不同目標(biāo)識(shí)別序列的抗體分子混合物組成。一旦血清用完，新的動(dòng)物必須被免疫。獲得的新血清包含具有新特異性和親和特性的c-Fos抗體的新混合物，導(dǎo)致多克隆c-Fos抗體的實(shí)驗(yàn)性能在批次間產(chǎn)生差異。

使用單克隆重組兔c-Fos抗體226 008 ，可長久的解決批次間差異的問題。對(duì)表現(xiàn)一直優(yōu)異的大鼠單克隆c-Fos抗體226 017的c-Fos目標(biāo)識(shí)別域進(jìn)行測序，并將其與兔免疫球蛋白G的抗體恒定區(qū)融合（圖3）。

圖3：單克隆重組兔c-Fos抗體的創(chuàng)建。為生成重組兔抗c-Fos抗體226 008，將單克隆大鼠抗- c-Fos抗體226 017的目標(biāo)識(shí)別序列與兔特異性恒定抗體區(qū)域融合。

這種高度定義的單克隆重組抗體可在受控條件下作為無限資源在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)，且批次間差異Z小。它在我們的測試標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用中表現(xiàn)卓越，等同于或甚至好于兔多克隆c-Fos批次（圖4）。多克隆兔抗c-Fos抗體226 003極易受試驗(yàn)條件改變的影響（例如，IHC實(shí)驗(yàn)中孵化溫度可影響信號(hào)強(qiáng)度），而單克隆重組兔抗c-Fos抗體226 008在不同試驗(yàn)設(shè)置下染色結(jié)果依然穩(wěn)健，因此是你試驗(yàn)的Z好選擇。

隨著時(shí)間推移，這種單克隆抗體將會(huì)被用于很多不同應(yīng)用中，所有收集的信息都將有助于更好地描述此研究試劑。與多克隆抗體相反，這些信息不斷積累，永遠(yuǎn)不會(huì)丟失，使這種研究試劑成為您手中越來越有價(jià)值和可靠的工具。

圖4：單克隆重組兔抗- c-Fos抗體226 008在所有的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用中都表現(xiàn)優(yōu)異。重組兔抗- c-Fos抗體226 008與單克隆大鼠抗c-Fos抗體226 017和多克隆兔抗c-Fos抗體226 003在相同試驗(yàn)條件下相比。在IHC和IHC-P試驗(yàn)中，c-Fos抗體可用于小鼠和大鼠海馬體切片的間接免疫染色（小鼠切片顯示；IHC：c-Fos = 紅色，DAPI = 藍(lán)色；IHC-P：c-Fos = 棕色，蘇木精 = 藍(lán)色）。在ICC試驗(yàn)中，c-Fos抗體可用于大鼠海馬體神經(jīng)元的間接免疫染色（c-Fos = 紅色，MAP 2 188 011/188 002 = 綠色，DAPI = 藍(lán)色）。在免疫印跡試驗(yàn)中，c-Fos可從TPA刺激的HeLa細(xì)胞的核提取物中檢測到（檢測方法：AP染色）。

參考文獻(xiàn)：

Asanuma and Ogawa, 1994: Pitfalls in Assessment of c-fos mRNA Expression in the Brain: Effects of Animal Handling. PMID: 7827709

Berghorn et al., 1994: cFos Immunoreactivity Is Enhanced with Biotin Amplification. PMID: 7983364

Chowdhury et al., 2000: Induction and adaptation of Fos expression in the rat brain by two types of acute restraint stress. PMID: 10822158

Davies and Metzger, 1983: Structural basis of antibody function. PMID: 6399980

Gaiddon et al., 1996: Brain-derived neurotrophic factor stimulates AP-1 and cyclic AMP-responsive element dependent transcriptional activity in central nervous system neurons PMID: 8632149

Gallo et al., 2018: Immediate Early Genes, Memory and Psychiatric Disorders: Focus on c-Fos, Egr1 and Arc. PMID: 29755331

Glover and Harrison, 1995: Crystal structure of the heterodimeric bZIP transcription factor c-Fos-c-Jun bound to DNA. PMID: 7816143

Herrera and Robertson, 1996: Activation of c-fos in the brain. PMID: 8971979

Mayer and Bendayan, 2001: Amplification methods for the immunolocalization of rare molecules in cells and tissues. PMID: 11194866

Morgan et al., 1987: Mapping Patterns of c-fos Expression in the Central Nervous System After Seizure. PMID: 3037702

Sheng and Greenberg, 1990: The Regulation and Function of c-fos and Other Immediate Early Genes in the Nervous System. PMID: 1969743

Wakhloo et al., 2020: Functional hypoxia drives neuroplasticity and neurogenesis via brain erythropoietin. PMID: 32152318

Werner et al. 1996, Antigen retrieval, signal amplification and intensification in immunohistochemistry. PMID: 9072182

Ye et al., 2014: Small Molecule Inhibitors Targeting Activator Protein 1 (AP-1). PMID: 24831826

Synaptic Systems（SySy）品牌成立于德國，專注于研發(fā)和生產(chǎn)針對(duì)突觸和神經(jīng)科學(xué)相關(guān)抗體，以及用于細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)和高分辨率顯微鏡的各種抗體，除此之外，還推出與SySy抗體配套使用的試劑盒、試劑等產(chǎn)品組合，全方面滿足客戶的各種需求。抗體產(chǎn)品線主要有：突觸活性區(qū)域相關(guān)抗體、突觸后蛋白相關(guān)抗體、RNA修飾如m6A抗體、突觸粘附蛋白抗體、SNARE相關(guān)抗體、Alzheimer's相關(guān)抗體、細(xì)胞骨架、離子通道相關(guān)抗體等。該品牌產(chǎn)品專業(yè)且質(zhì)量好，在國內(nèi)外備受好評(píng)。作為SySy在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的SySy產(chǎn)品。