螢火蟲(chóng)熒光素酶已被用作研究各種生物反應(yīng)的敏感報(bào)告基因。它首先從北美 Photinus pyralis 克隆，在 ATP 和鎂存在下催化 D-熒光素的氧化，發(fā)出黃光。該反應(yīng)具有較高的量子產(chǎn)率，并且熒光素酶和熒光素都具有低毒性。這些特性使 Firefly 熒光素酶成為一種常用的工具。另一方面，海腎熒光素酶是 ATP 非依賴性的，在氧氣存在下將腔腸素轉(zhuǎn)化為腔腸酰胺，發(fā)出藍(lán)光。與熒光蛋白相比，兩種熒光素酶的半衰期都相對(duì)較低，并且可以進(jìn)行動(dòng)態(tài)研究。通過(guò)對(duì)同一樣品中的對(duì)照?qǐng)?bào)告基因（例如海腎熒光素酶報(bào)告基因）進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，可以提高螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因響應(yīng)特定刺激的準(zhǔn)確性。

兩步熒光素酶（Firefly & Renilla）檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)計(jì)用于在單個(gè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)樣品中高通量、快速定量Firefly和Renilla熒光素酶。它隨附的試劑足以在 96 孔板中進(jìn)行 100 次檢測(cè)，每次 100 μl。

該檢測(cè)系統(tǒng)具有幾個(gè)相關(guān)功能：

• 靈敏 – 對(duì) Firefly 和 Renilla 熒光素酶活性的高靈敏度檢測(cè)。

• 穩(wěn)定 — 熒光素酶信號(hào)輸出可穩(wěn)定保存 1 小時(shí)以上，提供靈活的孵育時(shí)間。

• 高通量 – 其簡(jiǎn)單的均相方案可最大限度地減少處理步驟，并支持高通量篩選應(yīng)用。

• 兼容性 – 適用于含有高達(dá) 10% 血清和酚紅的各種常見(jiàn)培養(yǎng)基。

兩步熒光素酶（Firefly & Renilla）檢測(cè)系統(tǒng)方案概述。

將 Firefly 熒光素酶試劑直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)基中。該試劑可裂解細(xì)胞，并包含允許 Firefly 熒光素酶產(chǎn)生發(fā)光信號(hào)的底物。接下來(lái)，將 Renilla Luciferase Reagent 添加到同一孔中。該試劑淬滅 Firefly 熒光素酶發(fā)光，并為海腎熒光素酶提供底物以產(chǎn)生海腎熒光素酶發(fā)光信號(hào)。兩種反應(yīng)產(chǎn)生的信號(hào)都可以在光度計(jì)上方便地測(cè)量。

兩步熒光素酶（螢火蟲(chóng)和海腎）檢測(cè)系統(tǒng)中涉及的化學(xué)反應(yīng)。

Firefly 熒光素酶試劑緩沖液（組分 A）和 Firefly 熒光素酶試劑底物（組分 B）產(chǎn)生信號(hào)的化學(xué)反應(yīng)。灣。海腎熒光素酶試劑緩沖液（組分 C）和海腎熒光素酶試劑底物（組分 D）參與信號(hào)生成的化學(xué)反應(yīng)。

熒光素、Firefly 熒光素酶、熒光素酶緩沖液、海腎、熒光素酶檢測(cè)緩沖液

使用兩步熒光素酶(Firefly&Renila)檢測(cè)系統(tǒng)和另一種市售熒光素酶試劑測(cè)量熒光素酶活性

兩步熒光素酶(螢火蟲(chóng)和海腎)檢測(cè)系統(tǒng)組件海腎熒光素酶檢測(cè)工作溶液可以完全淬滅螢火蟲(chóng)衍生的發(fā)光

BPS bioscience總部坐落于美國(guó)圣地亞哥生命科學(xué)研究機(jī)構(gòu)和公司集中地的中心。公司主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶及其抑制劑的篩選試劑盒。BPS公司為藥物研發(fā)用重組酶類的提供了重要的選擇。