該檢測利用了兩種高度特異性的單克隆抗體：將瘦素特異性的單克隆抗體固定在微孔板上，將瘦素不同表位特異性的雙克隆抗體與生物素結合。

在第一步中，樣品和標準品中存在的瘦素與固定抗體和生物素化抗體結合，從而形成三明治復合物。通過洗滌步驟去除過量和未結合的生物素化抗體。

第二步，加入鏈霉抗生物素蛋白-HRP，它能特異性結合任何結合的生物素化抗體。同樣，未結合的鏈霉抗生物素蛋白-HRP通過洗滌步驟去除。

接下來，加入酶底物（TMB），形成與瘦素含量成正比的藍色產物。通過加入終止溶液使酶反應停止，將藍色轉化為黃色。在450nm處用微量滴定板讀數器測量吸光度。使用一組標準來繪制標準曲線，從中可以直接讀取樣品和對照中的瘦素含量。

瘦素ELISA試劑盒用于酶免疫測定法定量測定人血清中的瘦素。此試劑盒僅供研究使用。不用于診斷程序。

艾美捷瘦素ELISA試劑盒（ALP-11-LEPHU-E01）測定程序：

所有試劑在使用前必須達到室溫。校準品、質控品和樣本應進行雙重測定。一旦開始程序，所有步驟都應在無中斷的情況下完成。

1. 所有試劑盒組分達到室溫后，輕輕倒置混合。

2. 準備生物素-過氧化物酶結合物和洗滌緩沖液的1X工作溶液。

3. 計劃微孔板孔的使用，用于校準品、質控品和樣本。參見推薦的測定布局。取出將不使用的條帶，并將它們放回帶有干燥劑的袋子里。重新密封未使用條帶的袋子并放回冰箱。

4. 將每個校準品、質控品和血清樣本的20微升分別雙重加入相應的孔中。

5. 將80微升的單克隆抗瘦素-生物素結合物加入每個孔中。推薦使用多通道移液管。

6. 在直徑3毫米的微孔板振蕩器上（大約600轉/分鐘）在室溫下孵育1小時。

7. 使用自動微孔板洗滌器（首選）或按以下描述手動洗滌微孔板孔。自動：使用自動微孔板洗滌器，使用1X工作洗滌緩沖液進行3周期洗滌（每個孔300微升×3）。一個周期包括吸干所有孔，然后用1X工作洗滌緩沖液填充每個孔300微升。在最后洗滌周期后，吸干所有孔，然后將微孔板牢固地敲擊在吸水紙上以去除任何殘留液體。手動：對于手動洗滌，使用1X工作洗滌緩沖液進行3周期洗滌（每個孔300微升×3）。一個周期包括通過迅速將孔中的內容物倒入廢物容器來吸干所有孔，然后使用多通道移液管將300微升的1X工作洗滌緩沖液加入每個孔中。在最后洗滌周期后，通過迅速將孔中的內容物倒入廢物容器來吸干所有孔，然后將微孔板牢固地敲擊在吸水紙上以去除任何殘留液體。

8. 將100微升的1X工作生物素-過氧化物酶結合物加入每個孔中。推薦使用多通道移液管。

9. 在直徑3毫米的微孔板振蕩器上（大約600轉/分鐘）在室溫下孵育30分鐘。

10. 按照步驟7的方式再次洗滌微孔板孔。

11. 在定時間隔將100微升的TMB底物加入每個孔中。推薦使用多通道移液管。

12. 在直徑3毫米的微孔板振蕩器上（大約600轉/分鐘）在室溫下孵育10-15分鐘。

13. 按照步驟11的相同定時間隔將50微升的終止溶液加入每個孔中。推薦使用多通道移液管。輕輕敲擊微孔板框架以混合孔中的內容物。

14. 在加入終止溶液后20分鐘內，使用設置為450納米的吸光度微孔板閱讀器測量微孔板孔中的光密度（吸光度）。

計算：

1. 計算每個校準品、質控品和樣本雙重測定的平均光密度。

2. 使用免疫分析軟件進行4或5參數曲線擬合以生成校準曲線。

3. 免疫分析軟件將使用平均光密度值和校準曲線計算質控品和樣本的濃度。

4. 如果樣本讀數超過100 ng/mL，則用測定緩沖液稀釋，稀釋度不超過1:8。所得結果必須乘以稀釋因子。

瘦素ELISA試劑盒典型表格數據：

僅提供示例數據。不用于計算結果