ALPCO胰島素ELISA是一種夾心型免疫測定法。96孔微孔板涂有胰島素特異性單克隆抗體。將標準品、對照品和樣品加入帶有檢測抗體的微孔板孔中。然后將微孔板在酰胺板振蕩器上以700-900rpm的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗滌緩沖液洗滌孔并吸干。加入TMB底物，在微孔板振蕩器上以700-900rpm的速度第二次孵育微孔板。一旦第二次孵育完成，加入停止溶液，用分光光度計在450nm處測量光密度（OD）。產(chǎn)生的顏色強度與樣品中胰島素的量成正比。

ALPCO胰島素ELISA用于定量測定血清和血漿中的胰島素。

艾美捷胰島素ELISA（ALP-80-INSHU-E01.1）供應(yīng)的材料：

*請參閱每個試劑盒隨附的分析證書，了解批次特定的控制范圍和復(fù)溶量。

儲存條件：

試劑盒應(yīng)儲存在2-8°C的條件下。試劑盒在盒子標簽上的有效期之前是穩(wěn)定的。

樣本處理：

血清和血漿（肝素或EDTA）樣本適用于此測定。不需要對樣本進行稀釋或處理。然而，如果樣本的胰島素濃度高于最高標準，應(yīng)將樣本在零標準中稀釋，然后重復(fù)分析。樣本可以在分析前在2-8°C下儲存24小時。建議在-20°C以下儲存更長時間。避免反復(fù)凍融。建議在使用前1）徹底渦旋每個樣本，2）在不停頓的情況下進行移液操作。

試劑準備：

所有試劑在使用前必須平衡至室溫，然后用于測定的準備和后續(xù)使用。洗滌緩沖液濃縮液需用20份蒸餾水稀釋。例如，要準備工作強度洗滌緩沖液，用400毫升去離子水稀釋20毫升洗滌緩沖液濃縮液（21倍）。工作強度洗滌緩沖液在室溫（18-25°C）下穩(wěn)定4周。

糖尿病控制品（1級和2級）以凍干形式提供。請參考隨每個試劑盒提供的分析證書，了解適當?shù)娜ルx子水體積用于復(fù)溶。用橡膠塞和蓋子封閉小瓶，輕輕搖晃小瓶，使用前讓其靜置30分鐘。小瓶中的內(nèi)容物應(yīng)完全溶解，無可見顆粒。復(fù)溶的控制品在2-8°C下儲存7天穩(wěn)定。如果需要，控制品可以分裝后在-20°C以下儲存長達6個月。控制品不應(yīng)反復(fù)凍融。

質(zhì)量控制：

建議在每次測定中包含ALPCO胰島素ELISA提供的控制品。控制品的濃度范圍在每個試劑盒提供的分析證書上提供；然而，建議每個實驗室建立自己的可接受范圍。

所需材料：

- 用于分配25 - 100微升的精密移液管（帶一次性吸頭）

- 用于分配100微升的可重復(fù)或多通道移液管

- 用于試劑配制的容量瓶和移液管

- 用于試劑配制的蒸餾水或去離子水

- 微孔板洗滌器或洗滌瓶

- 能夠達到700-900轉(zhuǎn)/分鐘的微孔板振蕩器

- 帶有450納米濾光片的微孔板閱讀器

- 用于樣本制備的渦旋混合器。

結(jié)果計算：

從標準品構(gòu)建標準曲線。零標準應(yīng)作為空白，其平均值應(yīng)從每個孔中減去。建議使用軟件程序來計算標準曲線并確定樣本的濃度。胰島素ELISA是一種配體結(jié)合測定，其反應(yīng)與分析物濃度呈S形關(guān)系。目前公認的此類曲線的參考模型使用4或5參數(shù)邏輯（pl）擬合，因為這些模型能在更大范圍內(nèi)優(yōu)化準確性和精確度。盡管三次樣條和其他模型是可接受的方法，但它們通常在檢測范圍的低值和高值端顯示出較低的測定內(nèi)準確性和精確度。

胰島素ELISA文獻參考：

Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.