ALPCO-Mouse Insulin ELISA/小鼠胰島素ELISA試劑盒：用于定量測(cè)定小鼠血清和血漿中的胰島素。

艾美捷Mouse Insulin ELISA/小鼠胰島素ELISA試劑盒（80-INSMS-E01）檢測(cè)原理：

ALPCO小鼠胰島素ELISA是一種夾心型免疫分析方法。96孔微孔板被涂覆以特異性胰島素單克隆抗體。標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本被加入到微孔板孔中與結(jié)合物一起。然后微孔板在室溫下放置在微孔板振蕩器上，以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度振蕩。第一次孵育完成后，孔被洗滌并擦干。接著加入TMB底物，微孔板再次在室溫下放置在微孔板振蕩器上，以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度振蕩。第二次孵育完成后，加入終止液，并在450納米處用分光光度計(jì)測(cè)量光密度（OD）。產(chǎn)生的色度強(qiáng)度與樣本中的胰島素量成正比。

所需材料：

- 用于分配高達(dá)100微升的精密移液管（帶一次性吸頭）

- 用于分配高達(dá)100微升的重復(fù)或多通道移液管

- 用于試劑準(zhǔn)備的量筒和移液管

- 用于試劑準(zhǔn)備的蒸餾水或去離子水

- 微孔板洗滌器或洗滌瓶

- 能夠以700-900轉(zhuǎn)每分鐘速度振蕩的微孔板振蕩器

- 帶有450納米濾光片的微孔板讀取器

- 用于樣本準(zhǔn)備的漩渦混合器

注意事項(xiàng)：

1. 該試劑盒中包含的人血液制品已檢測(cè)HIV（人類免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）和HCV（丙型肝炎病毒）的存在。這些病毒的檢測(cè)方法不能保證病毒的缺失；因此，所有試劑應(yīng)被視為潛在感染性。處理和處置應(yīng)遵循所有適當(dāng)?shù)膰?guó)家和地方法規(guī)，以處理潛在的生物危害材料。

2. 所有源自動(dòng)物的材料均為BSE陰性。然而，所有材料應(yīng)被視為潛在感染性。

3. 避免直接與皮膚接觸。

4. 本產(chǎn)品不可內(nèi)服。

5. 使用本產(chǎn)品時(shí)，避免進(jìn)食、飲水或吸煙。

6. 不要口吸任何試劑。

7. 試劑盒中的試劑是特定批次的，不得替換。

8. 不要使用超過(guò)有效期的試劑。

9. 不建議更改測(cè)試程序，可能會(huì)影響測(cè)試結(jié)果。

測(cè)試程序：

所有試劑和微孔板條應(yīng)在使用前平衡至室溫（18-25°C）。使用前輕輕混合所有試劑。每次運(yùn)行測(cè)試時(shí)，如果同時(shí)使用多個(gè)微孔板，則每個(gè)微孔板都必須進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)試。所有標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本應(yīng)以雙份運(yùn)行。

1. 在打開(kāi)鋁箔袋之前，應(yīng)將微孔板平衡至室溫。為標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本的雙重測(cè)定指定足夠的微孔板條。剩余的微孔板條應(yīng)存放在含有干燥劑的密封鋁箔袋中，存放在2-8°C。

2. 將每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本的10微升分別滴入相應(yīng)的孔中。有關(guān)對(duì)照品重組說(shuō)明，請(qǐng)參閱試劑準(zhǔn)備和分析證書。

3. 向每個(gè)孔中滴入75微升的工作強(qiáng)度結(jié)合物（見(jiàn)試劑準(zhǔn)備）。

4. 用板封蓋覆蓋微孔板，并在室溫下振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度振蕩，孵育2小時(shí)。

5. 倒掉孔中的內(nèi)容，并使用微孔板洗滌器用每個(gè)孔350微升的工作強(qiáng)度洗滌緩沖液洗滌微孔板6次（見(jiàn)試劑準(zhǔn)備）。或者，使用配備洗滌噴嘴的洗滌瓶將工作強(qiáng)度洗滌緩沖液注入孔中。（不建議使用多通道移液管。洗滌液必須以足夠且相等的力量分配，以便正確洗滌孔。）在洗滌之間，倒置微孔板以丟棄液體，并在吸水紙上用力拍打倒置的微孔板。在最后一次洗滌后（自動(dòng)或手動(dòng)），通過(guò)倒置并在吸水紙上用力拍打微孔板，從孔中去除任何殘留的洗滌緩沖液和氣泡。

6. 向每個(gè)孔中滴入100微升的TMB底物。

7. 用板封蓋覆蓋微孔板，并在室溫下振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度振蕩，孵育15分鐘。

8. 向每個(gè)孔中滴入100微升的終止液，并輕輕搖晃微孔板以混合內(nèi)容物。在進(jìn)行下一步之前，去除任何氣泡。

9. 將微孔板放入能夠讀取450納米處吸光度的微孔板讀取器中。微孔板應(yīng)在加入終止液后立即分析，且不超過(guò)30分鐘。

結(jié)果計(jì)算：

從標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。將零點(diǎn)作為曲線的一部分。建議使用軟件程序計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線并確定樣本的濃度。

ALPCO小鼠胰島素ELISA是一種配體結(jié)合測(cè)定，其響應(yīng)與分析物濃度呈S形關(guān)系。目前接受的此類曲線的參考模型使用5參數(shù)邏輯（pl）擬合，因?yàn)榇四Ｐ涂梢栽诟蠓秶鷥?nèi)優(yōu)化準(zhǔn)確性和精確性。盡管三次樣條和其他模型是可以接受的方法，但它們通常在范圍的低端和高端顯示出較低的內(nèi)部測(cè)試準(zhǔn)確性和精確性。

在以下示例中，使用了5 pl曲線擬合來(lái)最大化低濃度樣本的準(zhǔn)確性和精確性。然而，由于個(gè)體實(shí)驗(yàn)室條件的影響，所有模型的準(zhǔn)確性和精確性在可檢測(cè)范圍的最低端和最高端都是有限的。因此，在解釋分析物響應(yīng)變?yōu)榉蔷€性時(shí)的結(jié)果時(shí)，始終需要謹(jǐn)慎。

不建議將樣本濃度值外推至標(biāo)準(zhǔn)濃度值范圍之外。

文獻(xiàn)參考：

Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.

短期測(cè)定方案：