抗體或蛋白標(biāo)記是指將標(biāo)記物（酶，熒光素，生物素等）共價(jià)連接到抗體或其他蛋白上，與待檢測(cè)物（如某些特定抗原）特異性反應(yīng)形成多元復(fù)合物，并借助于熒光顯微鏡、射線測(cè)量?jī)x、酶標(biāo)檢測(cè)儀、電子顯微鏡和發(fā)光免疫測(cè)定儀等精密儀器對(duì)試驗(yàn)結(jié)果直接鏡檢觀察或進(jìn)行自動(dòng)化測(cè)定，可以在細(xì)胞、亞細(xì)胞、超微結(jié)構(gòu)及分子水平上對(duì)抗原、抗體反應(yīng)進(jìn)行定性和定位研究或應(yīng)用各種液相和固相免疫分析方法對(duì)體液中的半抗原、抗原進(jìn)行定性和定量測(cè)定。目前抗體標(biāo)記技術(shù)己被廣泛用于醫(yī)學(xué)病理學(xué)、免疫組織化學(xué)、分子生物學(xué)、生物制藥等領(lǐng)域的分析研究與技術(shù)測(cè)定，常見的抗體標(biāo)記技術(shù)包括酶標(biāo)記法，生物素化標(biāo)記法，熒光素標(biāo)記法等。

常用的抗體/蛋白標(biāo)記技術(shù)：

1. 酶標(biāo)記

通過共價(jià)鍵經(jīng)適當(dāng)方法將酶聯(lián)結(jié)在抗體或蛋白上，制成酶標(biāo)抗體，再借酶對(duì)底物的特異催化作用，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，這些有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀查，也可以用分光光度計(jì)測(cè)定，呈色反應(yīng)顯示了酶的存在，從而證明發(fā)生了相應(yīng)的免疫反應(yīng)。

蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)綴合通常用雙功能接頭交聯(lián)劑（例如常用的SMCC）進(jìn)行，交聯(lián)劑的一端（通過NHS酯）與氨基酸賴氨酸和N-末端中發(fā)現(xiàn)的胺（-NH2）反應(yīng)，另一端（通過馬來酰亞胺）與氨基酸中發(fā)現(xiàn)的硫醇基團(tuán)（-SH）反應(yīng)。然而，SMCC修飾的蛋白質(zhì)極不穩(wěn)定并且通常是自身反應(yīng)性的。

美國(guó)AAT Bioquest開發(fā)的Buccutite 過氧化物酶（HRP）抗體偶聯(lián)試劑盒可用于直接從蛋白質(zhì)，肽和含有游離氨基的其他配體制備辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)物。試劑盒中提供的HRP已使用我們專有的接頭Buccutite FOL預(yù)先激活，可直接用于綴合。 Buccutite FOL活化的HRP在極其溫和的中性條件下容易與含有Buccutite MTA的分子反應(yīng)，無(wú)需任何催化劑

優(yōu)勢(shì)：與常用的SMCC和其他類似技術(shù)相比，我們的Buccutite 生物共軛系統(tǒng)更易于使用，它能夠以更高的效率和產(chǎn)量實(shí)現(xiàn)生物分子的更快和定量綴合。

辣根過氧化物酶(HRP)抗體偶聯(lián)試劑盒（AAT-5504）工作示意圖

2. 生物素標(biāo)記

親和素與生物素都可與蛋白質(zhì)(包括抗原、抗體、酶等)、熒光素等分子結(jié)合而不影響后者的生物活性，是理想的標(biāo)記劑。一個(gè)抗體分子可偶聯(lián)數(shù)十個(gè)生物素或親和素分子，而親和素或生物素分子又可與酶或熒光素結(jié)合，從而組成一個(gè)生物放大系統(tǒng)，顯著提高檢測(cè)的靈敏度。常用的有親和素--生物素標(biāo)記法(Labeled avidin biotin，LAB)、親和素-生物素橋法(bridged avidin biotin, BAB)和親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法(avidin biotin peroxid asecomplex，ABC)。

美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的ReadiLink 蛋白質(zhì)生物素偶聯(lián)試劑盒（AAT-5520）可將各種生物分子標(biāo)記上生物素。試劑盒使用可與IgG和其他生物分子的氨基反應(yīng)的生物素琥珀酰亞胺酯進(jìn)行直接標(biāo)記，根據(jù)IgG分子上可用的分子量和賴氨酸殘基，可以將每個(gè)IgG分子與3-6個(gè)生物素分子綴合。

優(yōu)勢(shì)：簡(jiǎn)便快捷，一小時(shí)內(nèi)完成。

生物素琥珀酰亞胺酯化學(xué)結(jié)構(gòu)

3. 熒光標(biāo)記

染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合要求在染料和蛋白質(zhì)之間形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵，且在大多數(shù)條件下這種共價(jià)鍵不可被破壞。與蛋白質(zhì)的固有熒光相比，小型有機(jī)染料在選擇標(biāo)記位點(diǎn)時(shí)具有更大的靈活性以及熒光的增強(qiáng)性，已廣泛用于蛋白質(zhì)標(biāo)記中。在用適當(dāng)?shù)娜玖蠘?biāo)記后，可以在各種生物過程中對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行可視化，從而使它們可以生化檢測(cè)中被定量或在細(xì)胞研究中定位。染料-蛋白質(zhì)綴合物已成為研究酶活性，蛋白質(zhì)相互作用，構(gòu)象變化以及調(diào)節(jié)和觀察特定生物學(xué)過程的非常重要的工具，已在ELISA，蛋白質(zhì)印跡，流式細(xì)胞檢測(cè)和細(xì)胞成像中得到廣泛應(yīng)用。

美國(guó)AAT Bioquest的ReadiLink™快速抗體標(biāo)記試劑盒提供了一種便捷的方法，可以從如iFluor™染料和mFluor™染料以及其他小型有機(jī)染料等20多種熒光標(biāo)記來標(biāo)記抗體，標(biāo)記好的抗體完美兼容熒光成像或流式細(xì)胞儀等下游檢測(cè)。還提供ReadiLink™快速抗體標(biāo)記試劑盒，能夠?qū)⑸锼睾桶肟乖d體BSA和KLH偶聯(lián)到生物分子上，應(yīng)用于免疫和抗體生產(chǎn)。

ReadiLink™快速抗體標(biāo)記試劑盒的優(yōu)勢(shì)：

全面 -包括標(biāo)記100 µg抗體所需的所有試劑

方便 -簡(jiǎn)單的兩步標(biāo)記方案，不需要過柱純化

多功能 -能分別標(biāo)記的一抗、二抗以及蛋白質(zhì)（> 10 kDa），標(biāo)記的量大概為50-100 µg

穩(wěn)定 -產(chǎn)生穩(wěn)定結(jié)合熒光標(biāo)記的抗體偶聯(lián)物，用于下游基于熒光的成像或流式細(xì)胞儀應(yīng)用

ReadiLink™快速抗體標(biāo)記試劑盒選擇指南：

ReadiLink™快速抗體標(biāo)記試劑盒是如何工作的？

ReadiLink™快速抗體標(biāo)記試劑盒利用與胺反應(yīng)性部分（琥珀酰亞胺酯）偶聯(lián)的熒光團(tuán)，這些活性染料選擇性結(jié)合形成羧酰胺鍵的蛋白質(zhì)的脂族胺。這些羧酰胺鍵一旦形成，將非常穩(wěn)定，確保標(biāo)記物和蛋白質(zhì)之間不會(huì)解離。偶聯(lián)并添加TQ™染色的淬滅緩沖液后，任何游離的未結(jié)合ReadiLink™標(biāo)記將與淬滅劑結(jié)合并變?yōu)榉菬晒庑浴Ｌ砑覶Q™染色的淬滅緩沖液是關(guān)鍵，因?yàn)樗吮尘案蓴_以及色譜柱純化步驟。

ReadiLink™抗體標(biāo)記試劑盒包括進(jìn)行兩個(gè)結(jié)合反應(yīng)（2 x 50 µg）的所有基本成分。每個(gè)試劑盒均可用于標(biāo)記單克隆/多克隆抗體或其他蛋白質(zhì)（> 10 kD）。