釕可見光光交聯(lián)套件非常適合組織工程、細(xì)胞培養(yǎng)和生物打印，這些領(lǐng)域需要調(diào)節(jié)基質(zhì)的機(jī)械性能。該套件提供的光引發(fā)劑足夠用于>200毫升的生物墨水/水凝膠（按照推薦的濃度）。釕是一種利用可見光光交聯(lián)（400-450納米）來共價(jià)交聯(lián)游離酪氨酸和丙烯酸基團(tuán)的光引發(fā)劑。釕光引發(fā)劑已在I型膠原蛋白、明膠、絲素蛋白、甲基丙烯酸透明質(zhì)酸、甲基丙烯酸酯明膠、甲基丙烯酸酯I型膠原蛋白和PEGDA上進(jìn)行了測(cè)試。釕是水溶性的，并且具有更好的細(xì)胞相容性和交聯(lián)效率。使用釕將可見光強(qiáng)度從3-100mW/cm?增加并沒有顯著降低90%的細(xì)胞存活率。將釕濃度增加10倍（10倍）并沒有降低90%的細(xì)胞存活率。釕呈紅色/黃色/橙色，可以改變您的溶液、水凝膠或打印構(gòu)建物的顏色。這種釕光交聯(lián)套件被認(rèn)為是非無菌的。建議向您的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)添加抗生素，或進(jìn)行無菌過濾。為了進(jìn)行無菌過濾，重新懸浮整個(gè)體積的釕和硫酸鈉（分別），并通過小的0.2微米按鈕過濾器（分別）過濾。在2周內(nèi)使用無菌光引發(fā)劑。

艾美捷釕光引發(fā)劑/ Ruthenium Photoinitiator（ABM-5248-1KIT）：

存儲(chǔ)/穩(wěn)定性：產(chǎn)品在常溫下運(yùn)輸。將套件存放在室溫下。稱量所需量的粉末以溶解。一旦溶解后，需在2周內(nèi)使用釕和過硫酸鈉。干粉（未溶解的）在室溫下穩(wěn)定超過1年。

制備說明（示例計(jì)算可在文檔底部找到）

1. 計(jì)算所需的水凝膠或生物墨水體積（ECM + 細(xì)胞）。

2. 將所需體積乘以0.02。這是您將添加到預(yù)水凝膠溶液中的釕和過硫酸鈉（每種）的數(shù)量。

3. 以37.4 mg/mL的濃度在水或1X PBS中溶解所需的釕。

4. 以119 mg/mL的濃度在水或1X PBS中溶解過硫酸鈉。

5. 將計(jì)算出的體積（步驟2）的釕加入到您的預(yù)水凝膠溶液中，并徹底混合。

6. 將計(jì)算出的體積（步驟2）的過硫酸鈉加入到您的預(yù)水凝膠溶液中，并徹底混合。

注意：在添加到預(yù)水凝膠之前，不要將釕和過硫酸鈉混合在一起。您將得到一個(gè)快速的氧化還原反應(yīng)，它們會(huì)立即沉淀。

7. 如有需要，加入細(xì)胞。

8. 在400-450nm波長下進(jìn)行光交聯(lián)。初始建議是50 mW/cm?超過3分鐘以維持形狀/水凝膠的保真度。您可以調(diào)整光引發(fā)劑濃度、光強(qiáng)度和光交聯(lián)時(shí)間，以定制最終水凝膠的硬度。

附加說明：如果使用中和型I型膠原蛋白，您可以允許膠原蛋白在37°C下聚合形成水凝膠，然后進(jìn)行光交聯(lián)以進(jìn)一步交聯(lián)并調(diào)節(jié)凝膠的剛度。

如何將釕與Lifeink? 200 3D生物打印機(jī)一起使用：

1. 根據(jù)推薦的協(xié)議打印Lifeink? 200，進(jìn)入新鮮的FRESH支撐膠漿中。

2. 打印后，孵化打印物以熔化FRESH明膠支撐膠漿。

3. 大約30分鐘后，用溫暖的細(xì)胞培養(yǎng)基替換熔化的明膠。

例如，用移液管取出2毫升熔化的明膠，然后加入2毫升培養(yǎng)基。重復(fù)此步驟直到明膠被移除。

4. 準(zhǔn)備釕和過硫酸鈉的儲(chǔ)備溶液（在上述協(xié)議中找到）。

5. 計(jì)算您的Lifeink? 200結(jié)構(gòu)漂浮其中的培養(yǎng)基的總體積。將其乘以2%，并將該量的釕和過硫酸鈉添加到細(xì)胞培養(yǎng)基中（直接在您的結(jié)構(gòu)所在的相同盤中）。

6. 使用可見光（400-450納米）進(jìn)行光交聯(lián)，直到達(dá)到所需的交聯(lián)程度。

7. 如第3步中所做的，輕輕地用新鮮培養(yǎng)基替換培養(yǎng)基。

示例計(jì)算：

為了光交聯(lián)20毫升的中和膠原蛋白：

所需釕/過硫酸鈉的體積 = 20毫升 x 0.02 = 0.4毫升

需添加的釕 = 0.4毫升 x 37.4毫克/毫升 = 14.96毫克

在0.4毫升的1X PBS或水中溶解14.96毫克的釕。

需添加的過硫酸鈉 = 0.4毫升 x 119毫克/毫升 = 47.6毫克

在0.4毫升的1X PBS或水中溶解47.6毫克的過硫酸鈉。

按照上述指導(dǎo)將光引發(fā)劑與膠原蛋白溶液混合。

釕光引發(fā)劑文獻(xiàn)參考：

Lim, Khoon S., et al. "New visible-lightphotoinitiating system for improved print fidelity ingelatin-based bioinks." ACS Biomaterials Science& Engineering 2.10 (2016): 1752-1762.