新的A法用于定量測定人EDTA血漿中的血漿腎素活性（PRA）ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）。僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品腎素活性ELISA試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

腎素活性ELISA試劑盒檢測原理：

在免疫分析開始之前，向每個血漿樣本中添加蛋白酶抑制劑（PMSF），以防止血管緊張素I（Ang-I）的降解。然后向每個血漿樣本中加入生成緩沖液，使樣本的pH值達到約6.0。血漿樣本被分成兩份，分別在0-4°C（冰浴中）和37°C下孵育。在37°C下孵育的部分將由血漿中的腎素產(chǎn)生Ang-I。

PRA ELISA是一種競爭性分析。在第一次孵育步驟中，校準液、對照品、樣本中的Ang-I與Ang-I-生物素綴合物（生物素綴合物）之間發(fā)生競爭，以爭奪微孔板孔中有限數(shù)量的抗Ang-I抗體結(jié)合位點。在這次孵育過程中，存在蛋白酶抑制劑以防止Ang-I降解成更小的肽。在第二次孵育步驟中，加入鏈霉親和素-HRP綴合物，它特異性地與任何結(jié)合的生物素綴合物結(jié)合。通過洗滌步驟去除未結(jié)合的鏈霉親和素-HRP綴合物。接下來，加入TMB底物（酶底物），它與HRP反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物，其顏色的深淺與Ang-I的含量成反比。通過添加終止液來終止酶促反應(yīng)，將藍色變?yōu)辄S色。在450納米處的微孔板讀取器上測量吸光度。使用一組校準液繪制校準曲線，從中可以直接讀取樣本和對照品中Ang-I的濃度。根據(jù)0°C和37°C下孵育的樣本以及使用的時間，計算血漿樣本中的血漿腎素活性濃度。結(jié)果以單位時間內(nèi)每體積人血漿產(chǎn)生Ang-I的質(zhì)量（ng/mL/h）表示。

樣本預(yù)處理、血管緊張素I生成和儲存：

在進行測試之前，所有處理過的血漿樣本必須根據(jù)以下所述的血管緊張素I生成程序進行預(yù)處理。完成此程序后，每個血漿樣本將有兩個預(yù)處理的分裝樣本，一個0°C分裝樣本和一個37°C分裝樣本。

1. 如果使用的是新鮮抽取的血漿樣本，請繼續(xù)進行步驟2。如果使用的是冷凍血漿樣本，請將冷凍血漿樣本快速升溫至室溫，方法是將試管放入室溫水浴中。

2. 將每個血漿樣本的0.5 mL轉(zhuǎn)移到一個新的樣本管中。

3. 向每個血漿樣本的0.5 mL中加入5 ?L準備好的PMSF溶液（1:100比例）。使用渦旋混合器徹底混合每個試管。

4. 向步驟3處理過的樣本中加入50 ?L生成緩沖液（1:10比例）。再次使用渦旋混合器徹底混合試管。

5. 從步驟4的樣本中用移液管取0.25 mL到一個新的樣本管中。現(xiàn)在將有兩個處理過的血漿樣本分裝。將一個標記為0°C，另一個標記為37°C。

6. 同時將標記為37°C的試管放入37°C的孵箱中，將標記為0°C的試管放入冰浴（0-4°C）中90分鐘或更長時間（不要超過180分鐘）。務(wù)必記錄使用的孵育時間，因為這是需要計算血漿腎素活性的。

7. 孵育期結(jié)束時，將37°C的試管放入冰浴中5分鐘以快速冷卻。

8. 如果生成的樣本將立即進行測試，將兩個樣本管（0°C和37°C）放入室溫水浴中5-10分鐘，使其升溫至室溫。現(xiàn)在樣本已準備好進行測試。

9. 如果生成的樣本將在稍后進行測試，請立即將兩個樣本管（0°C和37°C）冷凍在≤-20°C下，最長可保存3個月。使用前，將冷凍生成的樣本放入室溫水浴中5-10分鐘，使其升溫至室溫。現(xiàn)在樣本已準備好進行測試。

典型校準曲線

僅示例曲線，不用于計算結(jié)果

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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