大鼠白蛋白ELISA是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測定法（ELISA），用于大鼠血清、血漿和尿液中白蛋白的測定。僅供研究使用。不是為了用于診斷程序。

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大鼠白蛋白ELISA檢測原理：

如圖1所示，在這種測定中，樣品中存在的白蛋白與已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗白蛋白抗體發(fā)生反應(yīng)。通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗白蛋白抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的白蛋白形成復(fù)合物。經(jīng)過另一次洗滌步驟后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB），檢測免疫吸附劑上的酶。結(jié)合的酶量與測試樣品中白蛋白的濃度直接相關(guān)；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中白蛋白濃度的量度。測試樣品中的白蛋白量可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得到，并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

檢測程序

請參閱附錄A以獲取參考血清信息。

1. 所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)以雙份量進(jìn)行檢測。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品應(yīng)盡快裝入ELISA孔中，以避免OD讀數(shù)發(fā)生偏移。使用多通道移液器可以減少這種情況的發(fā)生。

- 取100微升：

- 標(biāo)準(zhǔn)0（0.0納克/毫升）雙份

- 標(biāo)準(zhǔn)1（6.25納克/毫升）雙份

- 標(biāo)準(zhǔn)2（12.5納克/毫升）雙份

- 標(biāo)準(zhǔn)3（25納克/毫升）雙份

- 標(biāo)準(zhǔn)4（50納克/毫升）雙份

- 標(biāo)準(zhǔn)5（100納克/毫升）雙份

- 標(biāo)準(zhǔn)6（200納克/毫升）雙份

- 標(biāo)準(zhǔn)7（400納克/毫升）雙份

3. 取100微升樣品（雙份）加入預(yù)先指定的孔中。

4. 將微孔板在室溫下孵育三十（30±2）分鐘。孵育期間保持板蓋蓋好并保持水平。

5. 孵育后，抽吸孔中的內(nèi)容物。

6. 用適當(dāng)稀釋的洗滌液完全填滿每個孔并抽吸。重復(fù)三次，總共進(jìn)行四次洗滌。如果手動洗滌：用洗滌緩沖液完全填滿孔，然后將板倒置，將內(nèi)容物倒入廢液容器中。接著用力將孔敲擊在吸水紙上以去除殘留緩沖液。重復(fù)三次，總共進(jìn)行四次洗滌。

7. 取100微升適當(dāng)稀釋的酶-抗體結(jié)合物到每個孔中。在室溫下孵育三十（30±2）分鐘。孵育期間保持板蓋蓋好并置于暗處且保持水平。

8. 按照步驟5和6中描述的方式洗滌并拍干孔。

9. 取100微升TMB底物溶液到每個孔中。

10. 在暗處室溫下精確孵育十分鐘（10）。

11. 十分鐘后，向每個孔中加入100微升終止溶液。

12. 在30分鐘內(nèi)測定每個孔中內(nèi)容物的吸光度（450納米）。根據(jù)制造商的規(guī)格校準(zhǔn)板讀取器。

需要但未提供的物料

- 精密移液器（2微升至1000微升），用于制備和分發(fā)稀釋液

- 試管

- 微孔板洗滌/抽吸器

- 蒸餾水或去離子水

- 微孔板讀取器

- 制備試劑和緩沖溶液所需的各種玻璃器皿

- 計(jì)時(shí)器

- 用于樣品收集的離心機(jī)

- 抗凝劑（用于血漿樣品收集）

樣品收集和處理

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)物。處理和處置時(shí)應(yīng)遵循通用預(yù)防措施。如果血液樣品出現(xiàn)凝固、嚴(yán)重溶血、脂血或樣品完整性受到懷疑，請做好記錄，并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。以下列出的樣品收集和儲存條件僅供參考。樣品的穩(wěn)定性尚未評估。

- 血清樣品：應(yīng)通過靜脈穿刺收集血液。通過離心分離血清和細(xì)胞。取出血清并立即檢測或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融。

- 血漿樣品：應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即檢測或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融。

- 尿液樣品：使用無菌或清潔的尿液收集器收集中段尿液。離心以去除細(xì)胞碎片。立即檢測或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融。

- 已知干擾物質(zhì)：濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應(yīng)。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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