人源Cystatin C是一種存在于所有人體體液中的小分子半胱氨酸蛋白酶抑制劑。研究表明，Cystatin C的水平與腎小球濾過率直接相關(guān)。Cystatin C檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA），用于測量人體生物樣品中的Cystatin C。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品半胱氨酸蛋白酶抑制劑C ELISA。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

半胱氨酸蛋白酶抑制劑C ELISA檢測原理：

如圖1所示，在這種測定中，樣品中的Cystatin C與已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗Cystatin C抗體反應。通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗Cystatin C抗體。這些酶標記的抗體與之前結(jié)合的Cystatin C形成復合物。經(jīng)過另一次洗滌步驟后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測定與免疫吸附劑結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與樣品中測試的Cystatin C濃度直接相關(guān)；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中Cystatin C濃度的量度。測試樣品中的Cystatin C量可以從標準曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進行校正。

試劑（足夠進行96次測定的數(shù)量）

1. 稀釋液濃縮液（測定緩沖液）

一瓶含有50毫升5倍濃縮的稀釋液測定緩沖液。

2. 洗滌液濃縮液

一瓶含有50毫升20倍濃縮的洗滌液。

3. 酶-抗體結(jié)合物100倍

一瓶含有150微升與辣根過氧化物酶結(jié)合的人Cystatin C抗體親和純化物，置于穩(wěn)定化緩沖液中。

4. 顯色底物溶液

一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和過氧化氫在檸檬酸緩沖液中，pH值為3.3。

5. 終止液

一瓶含有12毫升0.3M硫酸。警告：避免與皮膚接觸。

6. 抗人Cystatin C ELISA微孔板

十二個可移動的八（8）孔微孔條在孔架中。每個孔都涂有親和純化抗人Cystatin C。

7. 人Cystatin C校準液

一瓶含有人Cystatin C校準液。

僅限研究使用

試劑準備

1. 稀釋液濃縮液

提供的稀釋液為5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）稀釋1:5。

2. 洗滌液濃縮液

提供的洗滌液為20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）稀釋1:20。當儲存溫度較低時，濃縮液中結(jié)晶形成并不罕見。稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

3. 酶-抗體結(jié)合物

通過向每個微孔板測試條添加10微升酶-抗體結(jié)合物至990微升1X稀釋液中，計算每個微孔板測試條所需的工作結(jié)合物溶液量。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

4. 顯色底物溶液

按提供使用即可。

5. 終止液

按提供使用即可。

6. 抗人Cystatin C ELISA微孔板

按提供使用即可。打開微孔板袋，從袋中取出板。取出在測定中不會使用的條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑。

結(jié)果

1. 從每個樣品的測試值中減去平均背景值。

2. 使用標準觀察到的結(jié)果構(gòu)建標準曲線。適當?shù)那€擬合是四參數(shù)邏輯曲線。也可以使用二階多項式（二次）或其他曲線擬合。

3. 從標準曲線中插值得到測試樣品值。校正血清稀釋因子，以得到原始樣品中的Cystatin C濃度。

程序限制

1. 當按照包裝說明書中的信息完全理解測定程序，并遵守良好的實驗室操作時，將獲得可靠和可重復的結(jié)果。

2. 可能影響測定性能的因素包括儀器功能的正確性、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質(zhì)量以及試劑和樣品移液、洗滌技術(shù)、孵育時間或溫度的準確性。

3. 不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合或替換。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉(zhuǎn)導、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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