大鼠C-反應(yīng)蛋白ELISA是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA）用于測(cè)定大鼠血清和血漿中的C-反應(yīng)蛋白（CRP）。用于研究。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品大鼠C反應(yīng)蛋白。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

大鼠C反應(yīng)蛋白檢測(cè)原理：

如圖1所示，這種測(cè)定中，樣品中的C反應(yīng)蛋白（CRP）與吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗CRP抗體反應(yīng)。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗CRP抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的CRP形成復(fù)合物。經(jīng)過(guò)另一次洗滌步驟后，通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)測(cè)定與捕獲抗體結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與樣品中測(cè)試的CRP濃度直接相關(guān)，因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣品中CRP濃度的量度。測(cè)試樣品中的CRP量可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

樣品收集和處理：

所有血液成分和生物材料應(yīng)被視為潛在危險(xiǎn)。處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。如果血液樣品出現(xiàn)凝固、嚴(yán)重溶血、脂血或樣品完整性有問(wèn)題，請(qǐng)做好記錄，并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。下面列出的樣品收集和儲(chǔ)存條件僅供參考。樣品穩(wěn)定性尚未評(píng)估。

- 血清樣品 - 應(yīng)通過(guò)靜脈穿刺采集血液。血液凝固后，通過(guò)離心分離血清。移除血清并立即檢測(cè)或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

- 血漿樣品 - 應(yīng)將血液采集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即檢測(cè)或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

- 已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

樣品稀釋：

測(cè)定要求每個(gè)測(cè)試樣品在使用前進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行測(cè)定時(shí)，所有樣品應(yīng)以雙份進(jìn)行測(cè)定。推薦的稀釋比例僅供參考。稀釋應(yīng)基于未知樣品的預(yù)期濃度，以使稀釋后的樣品落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣品水平，在運(yùn)行整個(gè)板之前，對(duì)一個(gè)或兩個(gè)代表性樣品進(jìn)行系列稀釋是非常推薦的。

血漿和血清樣品 - 建議的起始稀釋比例是1:12,000。要制備1:12,000的樣品稀釋液，將5微升的樣品轉(zhuǎn)移到495微升的1X工作稀釋液中。這會(huì)產(chǎn)生1:100的稀釋液。接下來(lái)，將5微升的1:100樣品轉(zhuǎn)移到595微升的1X工作稀釋液中。現(xiàn)在得到了1:12,000的樣品稀釋液。在每個(gè)階段都要徹底混合。

結(jié)果：

1. 從每個(gè)孔的測(cè)試值中減去平均背景值（零標(biāo)準(zhǔn)吸光度）。

2. 對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均重復(fù)讀數(shù)進(jìn)行平均，并使用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)減少數(shù)據(jù)來(lái)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們將是對(duì)數(shù)據(jù)的不太精確的擬合。

3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得到測(cè)試樣品值。校正血清稀釋因子，以得到原始樣品中的CRP濃度。

附錄A - 參考血清信息：

本試劑盒包含一瓶參考血清。請(qǐng)參閱隨附的產(chǎn)品概況表以獲取批特定信息。請(qǐng)注意以下幾點(diǎn)：

1. 收到參考血清后應(yīng)立即冷凍。如果儲(chǔ)存得當(dāng)，直到過(guò)期日期前都是穩(wěn)定的。

2. 參考血清應(yīng)適當(dāng)稀釋，以適應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍。請(qǐng)參閱協(xié)議中的“樣品稀釋”部分以獲取說(shuō)明。

3. 在移液樣品（程序部分）時(shí)，也應(yīng)以雙份移液參考血清。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長(zhǎng)。

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