ALPCO胰島素ELISA試劑盒用于定量檢測血清和血漿中的胰島素。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品胰島素ELISA試劑盒(10片)。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

胰島素ELISA試劑盒(10片)檢測原理：

ALPCO胰島素ELISA是一種夾心免疫分析法。96孔微孔板用針對(duì)胰島素的單克隆抗體包被。將標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品與檢測抗體一起加入微孔板孔中，然后在微孔板振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)/分鐘的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗滌緩沖液清洗孔并吸干。加入TMB底物后，再次在微孔板振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)/分鐘的速度孵育。第二次孵育完成后，加入終止液，并通過分光光度計(jì)在450納米處測量吸光度（OD）。生成顏色的強(qiáng)度與樣品中胰島素的含量成正比。

所需材料 

- 精密移液管，用于分裝25-100微升（配一次性吸頭）  

- 重復(fù)或多通道移液管，用于分裝100微升  

- 用于試劑準(zhǔn)備的容量瓶和移液管  

- 蒸餾水或去離子水，用于試劑準(zhǔn)備  

- 微孔板清洗器或洗液瓶  

- 能達(dá)到700-900轉(zhuǎn)/分鐘的微孔板振蕩器  

- 帶450納米濾光片的微孔板讀數(shù)儀  

- 用于樣品準(zhǔn)備的渦旋混合器  

注意事項(xiàng) 

1. 本試劑盒中的人類血液制品已檢測HIV（人類免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）和HCV（丙型肝炎病毒）。這些病毒的檢測方法不能保證病毒的完全不存在，因此所有試劑應(yīng)被視為潛在傳染性物質(zhì)。處理和丟棄應(yīng)符合所有適用的國家和地方關(guān)于潛在生物危害物質(zhì)處理的規(guī)定。  

2. 所有動(dòng)物源性材料均為BSE（瘋牛病）陰性。然而，所有材料仍應(yīng)被視為潛在傳染性物質(zhì)。  

3. 避免與皮膚直接接觸。  

4. 本產(chǎn)品不可內(nèi)服。  

5. 使用本產(chǎn)品時(shí)，避免進(jìn)食、飲水或吸煙。  

6. 不要用嘴吸取任何試劑。  

7. 本試劑盒中的試劑具有批次特異性，不得替換。  

8. 不要使用過期的試劑。  

9. 不建議更改檢測程序，否則可能影響檢測結(jié)果。  

儲(chǔ)存條件 

試劑盒應(yīng)在2-8℃下儲(chǔ)存。試劑盒在包裝標(biāo)簽上的有效期之前是穩(wěn)定的。

檢測步驟 

所有試劑和微孔板條應(yīng)在使用前平衡至室溫（18-25℃）。使用前輕輕混合所有試劑。每次檢測運(yùn)行和每塊微孔板（如果一次使用多塊）都必須進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測。所有標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品應(yīng)雙份運(yùn)行。

1. 在打開鋁箔袋之前，應(yīng)將微孔板平衡至室溫。為標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品的雙份測定準(zhǔn)備足夠的微孔板條。剩余的微孔板條應(yīng)密封在含有干燥劑的鋁箔袋中，于2-8℃保存。  

2. 將每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品分別加入到相應(yīng)的孔中，每孔25微升（參見試劑準(zhǔn)備部分的對(duì)照品復(fù)溶說明）。  

3. 每孔加入100微升檢測抗體。  

4. 用微孔板密封膜覆蓋微孔板，在室溫下孵育1小時(shí)，同時(shí)在微孔板振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)/分鐘的速度振蕩。  

5. 倒掉孔中的內(nèi)容物，用微孔板清洗器或洗液瓶（不要使用多通道移液管）用工作強(qiáng)度洗滌緩沖液（參見試劑準(zhǔn)備部分）每孔350微升清洗微孔板6次。每次清洗后，將微孔板倒置以倒掉液體，并用力將倒置的微孔板在吸水紙上敲擊。最后一次清洗（無論是自動(dòng)還是手動(dòng)）后，通過將微孔板倒置并用力敲擊在吸水紙上，去除孔中的任何殘留洗滌緩沖液和氣泡。  

6. 每孔加入100微升TMB底物。  

7. 用微孔板密封膜覆蓋微孔板，在室溫下孵育15分鐘，同時(shí)在微孔板振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)/分鐘的速度振蕩。  

8. 每孔加入100微升終止液，并輕輕振蕩微孔板以混合內(nèi)容物。在進(jìn)行下一步之前，去除任何氣泡。  

9. 將微孔板放入能夠讀取450納米吸光度的微孔板讀數(shù)儀中。在加入終止液后，應(yīng)立即分析微孔板，且不得超過30分鐘。  

結(jié)果計(jì)算 

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。零標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)作為空白，其平均值從每個(gè)孔中減去。建議使用軟件程序計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線，并確定樣品的濃度。

胰島素ELISA是一種配體結(jié)合分析法，其反應(yīng)與分析物濃度呈S形關(guān)系。目前接受的此類曲線參考模型使用4或5參數(shù)邏輯（pl）擬合，因?yàn)檫@些模型在整個(gè)范圍內(nèi)優(yōu)化了準(zhǔn)確性和精確性。雖然立方樣條和其他模型也是可接受的方法，但它們通常在范圍的低端和高端顯示出較低的內(nèi)部檢測準(zhǔn)確性和精確性。

在下面的例子中，使用了5-pl曲線擬合，以最大化低濃度樣品的準(zhǔn)確性和精確性。然而，由于個(gè)別實(shí)驗(yàn)室條件的影響，所有模型在可檢測范圍的最低端和最高端的準(zhǔn)確性和精確性都受到限制。因此，在解釋分析物反應(yīng)呈非線性時(shí)，應(yīng)始終謹(jǐn)慎。

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線 

以下結(jié)果僅用于演示目的，不能替代通過檢測獲得的數(shù)據(jù)。每次檢測運(yùn)行和每塊微孔板都必須進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測。

文獻(xiàn)參考：

1. Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays.AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267. 

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

作為ALPCO在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的ALPCO產(chǎn)品。