細胞死亡或細胞毒性通常通過評估質膜損傷的程度來評估。乳酸脫氫酶（LDH）是一種細胞內酶，在細胞損傷或裂解時釋放到細胞外介質中，使其成為細胞毒性作用的有用指標。

AkrivisBio 的LDH細胞毒性測定試劑盒用于評估細胞膜完整性并測量細胞死亡或細胞毒性。該檢測利用WST，一種四氮唑檢測試劑，對受損細胞的LDH釋放進行快速、高靈敏度的測量。顏色的強度與受損細胞的數量直接相關。

艾美捷AkrivisBio LDH基于細胞毒性的測定：

Catalog：CPT-0101

Size：Includes reagents for 500 reactions

Sample Type：Cells

Species：Non specific

Method of Detection：Colorimetric, OD 450 nm

Assay Type：Quantitative

Application：For the detection of LDH released from damaged cells.

Range：20000-100000 cells/100 ?l in wells of a 96-well plate

Storage Conditions：4°C

Shipping Temperature：Gel Pack

Shelf Life：One year from the date of delivery

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目錄：CPT-0101

尺寸：包括500個反應的試劑

樣本類型：單元格

物種：非特定

檢測方法：比色法，OD 450 nm

化驗類型：定量

應用：用于檢測受損細胞釋放的LDH。范圍：20000-100000個細胞/100?l，在96孔板的孔中

儲存條件：4°C

運輸溫度：凝膠包裝

保質期：一年

AkrivisBio LDH基于細胞毒性的測定組成：

WST檢測試劑1 ml透明NM MA-0109-A

含量測定緩沖液50 ml NM MA-0109-B

細胞裂解液5 ml琥珀色NM MA-0109-C

停止溶液5 ml藍色NM MA-0109-D

LDH（陽性對照）~1 U紅MA-0109-E

染色方案：

1、收集細胞（粘附或懸浮液），用新鮮培養(yǎng)基洗滌一次，然后將2-10 x 104個100?l的細胞加入96孔板的孔中，如下所示：

a.背景對照：每孔100?l無細胞培養(yǎng)基，一式三份。這允許校正由于試劑或來自培養(yǎng)基血清的LDHbackground引起的任何顏色。必須從所有其他值中減去背景值。

b.低對照組：每孔100?l細胞，一式三份。

c.高對照組：每個孔100?l細胞，一式四份，每個孔加10?l細胞裂解液并混合。為了校正對合組的差異，可以在步驟4（如下）中使用11?l培養(yǎng)基。

d.測試樣品：每個孔100?l細胞，一式三份，再將測試物質添加到每個孔中并混合。

注：

?胰蛋白酶或其他更溫和的方法可用于分離粘附細胞。

?每個孔使用的細胞數取決于細胞類型。為了優(yōu)化測定，每個孔使用2、4和8 x 104個細胞進行快速測試，然后按照測定方案確定應使用的細胞數。用10%細胞裂解液處理30分鐘后，高對照應為~2OD450 nm。在約30分鐘時，低對照應<0.8 OD450 nm。

?在1-2個孔中使用陽性對照（3-5?l LDH），以證明所有試劑對活性LDH酶都能正常工作。?如果試驗物質未溶解在PBS中，則應通過添加相同量的溶劑進行溶劑控制，一式三份，不添加其他試驗物質。

2、將細胞（5%CO2，90%濕度，37°C）孵育一段適當的處理時間，該時間由受試物質決定。培養(yǎng)結束后，輕輕搖動平板，以確保LDH在培養(yǎng)基中均勻分布。

3、以600 x g離心細胞10分鐘，使細胞沉淀。

4、將透明介質溶液（10?l/孔）轉移到光學透明的96孔板中。

5、向每個孔中加入100?l LDH反應混合物，混合并在室溫下孵育30分鐘**。

6、用讀板器在450 nm處測量所有對照品和樣品的吸光度。

注意：

?根據顯色速率調整反應時間。可以在多個時間點讀取印版，直到觀察到所需的讀數。高對照應為OD450 nm~2.0，而低對照應為OD 450 nm<0.8。

?可通過添加10?l停止溶液來停止反應，混合并在48小時內讀取，無顯著變化。保護反應不受光照和蒸發(fā)的影響。

LDH細胞毒性測定試劑盒II。Jurkat細胞如方案中所述在96孔板中孵育。使用WST探針，使用10?l培養(yǎng)基進行LDH測定。低控制（白色條）；高控制（黑條）。

AkrivisBio 致力于鑒別、開發(fā)和提供高質量的生物試劑和工具，這些試劑和工具在藥物發(fā)現、診斷和基礎研究等多個領域和應用中起著至關重要的作用。艾美捷科技是AkrivisBio的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。