重組PNGase F是從含有Elizabethkingia miricola基因克隆的大腸桿菌菌株中分離得到的。與天然酶（E-PNG01）相比，重組酶在活性或比活性上沒有可檢測的差異。

PNGase F能夠從糖蛋白中切割天冬酰胺連接的（N-連接的）寡糖。PNGase F將天冬酰胺脫氨基化為天冬氨酸，同時保持寡糖完整。變性可以增加切割速率高達(dá)100倍。大多數(shù)天然蛋白仍然可以被完全N-去糖基化，但需要增加孵化時間。PNGase F在孵化條件下至少能保持72小時的活性。PNGase F不會去除通常在植物糖蛋白中發(fā)現(xiàn)的含有Alpha-(1,3)-連接的核心巖藻糖的寡糖；為此，請使用肽N-糖苷酶A。

PNGase F來源：來自大腸桿菌中Elizabethkingia miricola的重組PNGase F基因。

艾美捷QA-Bio-重組PNGase F：

貨號：E-RPNG01

EC：3.5.1.52

內(nèi)容：

60 ?l的小包裝，包含0.3 U的重組PNGase F，在20 mM Tris-HCl，pH 7.5中

包含20 ?L和60 ?L包裝尺寸

5倍PNGase F反應(yīng)緩沖液7.5用于PNGase F 250 mM磷酸鈉，pH 7.5

PNGase F變性溶液 2% SDS，1 M β-巰基乙醇

PNGase F Triton X-100 15%溶液

比活性 ：>25 U/mg

活性： 5 U/ml

分子量 ：35,000道爾頓

PNGase F的pH范圍： 6-10，Z適pH 7.5

PNGase F建議用法：

向Eppendorf管中加入多達(dá)200 ?g的糖蛋白。用去離子水調(diào)整至35 ?l的最終體積。

加入10 ?l的5倍PNGase F反應(yīng)緩沖液7.5和2.5 ?l的PNGase F變性溶液。在100?C加熱5分鐘。

冷卻后，加入2.5 ?l的PNGase F Triton X-100并混合。

加入2.0 ?l的PNGase F至反應(yīng)中。在37?C孵化3小時。

特異性 PNGase F從糖蛋白中切割天冬酰胺連接的（N-連接的）寡糖。PNGase F將天冬酰胺脫氨基化為天冬氨酸，同時保持寡糖完整。變性可以增加切割速率高達(dá)100倍。大多數(shù)天然蛋白仍然可以被完全N-去糖基化，但需要增加孵化時間。PNGase F在孵化條件下至少能保持72小時的活性。PNGase F不會去除通常在植物糖蛋白中發(fā)現(xiàn)的含有Alpha-(1,3)-連接的核心巖藻糖的寡糖；為此，請使用肽N-糖苷酶A。

比活性 定義為在37?C，pH 7.5下，每分鐘催化1微摩爾RNase B釋放N-連接寡糖的酶量。通過SDS-PAGE監(jiān)測切割（切割后的RNase B遷移速度更快）。

儲存 將酶儲存在4?C。

QA-Bio-重組PNGase F文獻(xiàn)參考：

Bayer, E.A., F. De Meester, T. Kulik and M. Wilchek. Preparation of deglycosylated egg white avidin. Appl Biochem Biotech 53: 1-9 (1995)

Elder, J.H. and S. Alexander. endo-b-N-Acetylglucosaminidase F: endoglycosidase from Flavobacterium meningosepticum that cleaves both high-mannose and complex glycoproteins. Proc Natl Acad Sci USA 79: 4540-4544 (1982)

Tarentino, A .L., C.M. Gomez and T.H. Plummer, Jr. Deglycosylation of asparagine-linked glycans by peptide :N-glycosidase F. Biochemistry 24: 4665-4671 (1985)

Tarentino A.L. and T.H. Plummer. Enzymatic deglycosylation of asparagine -linked glycans: purification, properties, and specificity of oligosaccharide-cleaving enzymes from Flavobacterium meningosepticum. Meth Enzymol 230: 44-57 (1994)

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