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心肌球蛋白已從牛心臟組織中純化(1,2)。全長肌球蛋白用其必需輕鏈(ELC)和調(diào)節(jié)輕鏈(RLC)純化,見圖1和2。然后用α-胰凝乳蛋白酶消化肌球蛋白酶以釋放可溶性亞片段-1(S1)結(jié)構(gòu)域,該結(jié)構(gòu)域通過離心分離(3)。純化的肌球蛋白S1片段已被確定為在F-肌動蛋白激活的ATP酶測定中具有生物活性(參見生物活性測定)。牛心肌球蛋白S1片段蛋白以白色凍干粉末形式提供。
作為Cytoskeleton全國總代理,艾美捷科技強烈推薦Cytoskeleton熱銷產(chǎn)品肌球蛋白S1片段 (心臟),牛心臟。產(chǎn)品僅用于科研,不可用于臨床診斷。
Cytoskeleton公司目前主要的產(chǎn)品有340余種,其產(chǎn)品主要覆蓋肌動蛋白,微管蛋白,馬達蛋白,小G蛋白,細胞外基質(zhì),活細胞成像等相關(guān)領(lǐng)域,提供對應(yīng)的蛋白質(zhì),抗體,檢測與分析試劑盒,并且產(chǎn)品線還在不斷的擴大中。
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 詳情 |
| 肌球蛋白S1片段 (心臟),牛心臟 | CS-MYS03 | 查看 |
肌球蛋白S1片段 (心臟),牛心臟特點:
鈣激活肌球蛋白ATP酶活性與細絲結(jié)合時的測量。
鑒定/表征影響 TT 復(fù)合物調(diào)節(jié)和肌球蛋白 ATP 酶活性的蛋白質(zhì)或小分子
鑒定/表征影響肌球蛋白/F-肌動蛋白相互作用的蛋白質(zhì)或小分子
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| 圖1:肌球蛋白及其亞片段的示意圖 肌球蛋白是一種六聚體蛋白,由兩條重鏈和兩條輕鏈組成。肌球蛋白可在鎂存在下通過α-胰凝乳蛋白酶蛋白水解裂解成重美肌蛋白酶(HMM)和輕肌球蛋白酶(LMM)。然而,在存在 EDTA 的情況下,α-胰凝乳蛋白酶會產(chǎn)生可溶性肌球蛋白酶 S1 片段 (3)。 | 圖2:全長和 S1 肌球蛋白使用20-1%SDS-PAGE凝膠通過電泳分離4 μg全長牛心肌球蛋白(泳道A)和相應(yīng)的S20肌球蛋白(泳道B)樣品,并用考馬斯藍染色.箭頭表示肌球蛋白重鏈(約200 kDa),箭頭表示RLC(約20 kDa)和兩種ELC亞型(約25和21 kDa)。使用精密紅色?蛋白測定試劑(Cat.# ADV02)進行蛋白質(zhì)定量。Mark12分子量標記物來自Invitrogen。 |
存儲和共振
短暫離心以收集管底部的產(chǎn)品。用 1 ul Milli-Q 水(03 mg 瓶為 300 ml)重建 3 mg 管 MYS10 將在以下緩沖液中產(chǎn)生 3.3 mg/ml 心臟 S1 肌球蛋白儲備:20 mM PIPES pH 7.0,5% (w/v) 蔗糖和 1% (w/v) 葡聚糖。蛋白質(zhì)不應(yīng)暴露于重復(fù)的凍融循環(huán)中。凍干蛋白在4°C干燥(<10%濕度)下穩(wěn)定1年。
純度
蛋白質(zhì)純度通過在4-20%梯度聚丙烯酰胺凝膠上掃描考馬斯藍染色蛋白質(zhì)的密度測定來確定。測定用于產(chǎn)生肌球蛋白S1片段的肌球蛋白及其輕鏈純度為90%(見圖2)。
肌球蛋白S1片段 (心臟),牛心臟生物活性測定:
牛心肌球蛋白S1片段的生物活性可以通過其F-肌動蛋白活化的ATP水解速率來確定。該測定通過首先聚合肌動蛋白形成Factin,然后將心臟原肌球蛋白/肌鈣蛋白復(fù)合物(TT復(fù)合物)與肌動蛋白絲以化學計量量混合。這會產(chǎn)生類似于肌肉纖維細絲的涂層細絲。肌球蛋白以亞化學計量量添加,并用ATP和鈣引發(fā)反應(yīng)。嚴格的質(zhì)量控制確保在沒有鈣的情況下,TT復(fù)合物完全抑制肌球蛋白ATP酶。加入10uM鈣肌球蛋白ATP酶將恢復(fù)。鈣與肌鈣蛋白C結(jié)合,肌鈣蛋白C與F-肌動蛋白解離,使肌球蛋白結(jié)合。
Cytoskeleton專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發(fā)與生產(chǎn)。公司提供藥物篩選、信號轉(zhuǎn)導、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄后修飾(PTM)、細胞骨架研究相關(guān)的系列試劑盒和產(chǎn)品,尤其以細胞骨架相關(guān)研究見長,既能滿足于樣品較少的科學研究,也可以用于小規(guī)模篩選研究和高通量大規(guī)模篩選研究。此外,公司還提供微管蛋白,肌動蛋白,小G蛋白,GAPs,GEFs等現(xiàn)有產(chǎn)品的藥物篩選服務(wù)。

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