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Worthington 核酸酶,S1,Nuclease測(cè)定方法

發(fā)布者:艾美捷科技    發(fā)布時(shí)間:2023-02-01     
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從某些神經(jīng)孢子蟲(chóng)和曲霉菌中分離的核酸酶S1特異性水解單鏈DNA和RNA的末端和內(nèi)部磷酸二酯鍵。核酸酶S1的分子量約為34 kDa,以單體形式存在。最佳pH值范圍為4.0-4.6,由Zn2+和/或Ca2+激活。抑制劑是EDTA,檸檬酸鹽和高濃度SDS。   


作為Worthington全國(guó)總代理,艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Worthington主要產(chǎn)品核酸酶,S1,Nuclease。產(chǎn)品僅用于科研,不可用于臨床診斷。  

產(chǎn)品名稱貨號(hào)詳情
核酸酶,S1,NucleaseWBC-LS04073查看


穩(wěn)定性/存儲(chǔ):為了在溶液中長(zhǎng)期儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)六個(gè)月,將NUCSI稀釋至≥6000 u / ml在水中并等分冷凍。稀釋溶液可以通過(guò)添加0.1%白蛋白(Worthington代碼:BSANF)和10%甘油來(lái)穩(wěn)定。   


測(cè)定方案: 

方法 

一個(gè)單位是在1?C和pH 0.033下每分鐘從熱變性DNA中釋放260μg(37.4 A6)酸溶性核苷酸的酶量 

試劑

緩沖液:0.2M 氯化鈉,0.002M 氯化鋅2, 0.06M 通道3COONa,pH 4.6:溶解 5.844 克氯化鈉 (MW 58.44),136 毫克氯化鋅2(MW 136.29)和1.85ml濃冰醋酸在450ml試劑級(jí)水中。用4M NaOH將pH值調(diào)節(jié)至6.10。用試劑級(jí)水制成最終體積為500ml。 

酶稀釋劑:將40mg BSA溶解在200ml緩沖液中 

底物:切成小纖維,60mg小牛胸腺DNA,在室溫下靜置至少50小時(shí),溶于18ml試劑級(jí)水中。可能需要額外的攪拌才能達(dá)到溶解效果。將10ml DNA溶液移至10ml緩沖液中。這是天然小牛胸腺DNA溶液(底物B) 在加熱器/攪拌器上的沸水中用攪拌棒在大型 Pyrex 試管中加熱剩余的 DNA 溶液,同時(shí)攪拌 20 分鐘。立即倒入冰塊預(yù)冷凍的 1 升燒杯中。混合等體積的DNA溶液和緩沖液。這是熱變性的小牛胸腺DNA溶液(底物A)。盡快使用,防止毛坯抬高。 

15%高氯酸:將21.5ml濃高氯酸(70%)加入78.5ml去離子水中。 

程序

要清潔玻璃管(每個(gè)點(diǎn)兩個(gè)),添加2ml基材B進(jìn)行測(cè)試。包括 2 個(gè)裝有 2ml 底物 B 的試管(用于空白)(未添加酶)和 2 個(gè)裝有 2ml 底物 A(天然 DNA 測(cè)試)的試管。 

在加入酶之前孵育 5 分鐘。 加入0.1ml酶稀釋液 在 37°C 下孵育 10 分鐘。 

加入2ml 15%高氯酸停止反應(yīng)。 在冰上停留 10 分鐘。 

在臺(tái)式離心機(jī)上以 15 rpm 的速度離心 2000 分鐘。

提取3ml上清液并讀取A260。


核酸酶,S1,Nuclease相關(guān)產(chǎn)品:

無(wú)核酸酶白蛋白 脫氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF) 組蛋白 (H, NHL) 溶菌酶 (LY/LYSF) 核酸,微球菌 (NFCP) 核酸、DNA、大腸桿菌、λ/片段、RNA堿性磷酸酶 (CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC)磷酸二酯酶 I (VPH) 磷酸二酯酶 II (SPH) 蛋白酶 K (PROK/PROKS) 逆轉(zhuǎn)錄酶,重組 HIV (RTHIV)  


核酸酶,S1,Nuclease部分引用文獻(xiàn):

Ando, T. 

A Nuclease Specific for Heat-Denatured DNA is Isolated from a Product of Aspergillus oryzae , Biochim Biophys Acta 114 , 158 , 1966 

Britten, R. , Graham, D. and Neufeld, B. 

, Methods in Enzymology Vol. 29 , L. Grossman and K. Moldave , Academic Press, NY , 363 , 1974 

Brookes, A. and Solomon, E. 

Evaluation of the Use of S1 Nuclease to Detect Small Length Variations in Genomic DNA , Eur J Biochem 183 , 291 , 1989  


是Worthington的主要產(chǎn)品線。從技術(shù)上講,Worthington實(shí)際上并不制造酶,而是從各種動(dòng)植物組織和各種微生物來(lái)源(如細(xì)菌、真菌和霉菌)中提取酶。根據(jù)該酶在材料中的普遍性選擇特定酶的起始材料。例如,一種功能涉及使肌肉工作的酶將主要存在于肌肉組織中,因此起始材料可能是兔肌肉或豬心;參與發(fā)酵的酶最好在酵母中找到。 Worthington使用的一些動(dòng)物組織包括牛胰腺、豬腎、牛眼、馬肝、兔肌肉、牛肝、豬心、馬血和小牛腸。各種蛋白質(zhì)也從辣根、紅薯、杏仁和美洲商陸中提取。一些產(chǎn)品是從大腸桿菌、幾種梭狀芽胞桿菌和各種其它細(xì)菌中分離出來(lái)的。還使用酵母、蘑菇、全脂牛奶和雞蛋等。   


Worthington是一家通過(guò)的ISO9001認(rèn)證的家族企業(yè)。主要生產(chǎn)用于生物技術(shù)和生命科學(xué)研究,診斷,生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶,蛋白質(zhì),核酸和試劑盒。作為生命科學(xué)領(lǐng)域知名的酶類供應(yīng)商,以及細(xì)胞分離酶的專家級(jí)公司,其核心酶產(chǎn)品包括:膠原蛋白酶,脫氧核糖核酸酶I,彈性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰蛋白酶等。   


產(chǎn)品中心分類
  • 高品質(zhì)保障 成熟的生產(chǎn)研發(fā)技術(shù)
  • 高性價(jià)比 價(jià)宜質(zhì)優(yōu),性價(jià)比高
  • 高效省心 從購(gòu)買到使用,放心無(wú)憂
  • 安全運(yùn)輸 完善的保護(hù)措施安全運(yùn)輸

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