重組人R-spondin 1 LR5蛋白被設(shè)計(jì)為LGR5受體的高親和力配體。在上皮組織中，LGR5標(biāo)記干細(xì)胞群。這種工程蛋白R-spondin 1 LR5僅在LGR5+干細(xì)胞群中激活Wnt信號傳導(dǎo)。

R-spondin 1 LR5已在腸道類器官培養(yǎng)中進(jìn)行了測試，并支持類器官的存活和生長。由于LGR5特異性標(biāo)記干細(xì)胞，并且在轉(zhuǎn)運(yùn)擴(kuò)增細(xì)胞上沒有發(fā)現(xiàn)，因此在含有R-spondin 1 LR5的類器官培養(yǎng)物中觀察到的較低隱窩多樣性（與野生型R-sponding 1，Qk006相比）支持了這種工程形式特異性作用于干細(xì)胞的觀點(diǎn)。這種特殊形式的R-spondin 1是在Marc de la Roche的實(shí)驗(yàn)室（劍橋大學(xué)）開發(fā)的。

艾美捷QKine重組人R-spondin 1 LR5蛋白(Qk031)：

摘要：高純度重組人R-spondin 1 LR5蛋白。與LGR5受體具有更高的親和力。

純度 >98%，通過SDS-PAGE定量密度分析測定

分子量：13 kDa

表達(dá)系統(tǒng)：大腸桿菌（E. coli）

無動物源成分（AOF）且無載體蛋白

在英國劍橋的實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)

凍干自乙腈/三氟乙酸

復(fù)溶方法：在10 mM HCl中復(fù)溶至>100 ?g/ml（提供蛋白且免費(fèi)），制備單次使用分裝，如需可添加載體蛋白，然后在-20℃或-80℃冷凍保存

推薦應(yīng)用：

腸道類器官培養(yǎng)

進(jìn)一步質(zhì)量檢測：

質(zhì)譜分析：單一物種，具有預(yù)期質(zhì)量

分析型反相色譜：單一尖銳峰

內(nèi)毒素：<0.005 EU/?g蛋白（低于檢測水平）

從原瓶回收率：>95%

R-spondin 1在TOP-Flash報(bào)告基因檢測中增強(qiáng)Wnt信號傳導(dǎo)

在Wnt響應(yīng)性螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因TOP-FLASH轉(zhuǎn)染的HEK293T細(xì)胞中，用不同濃度的Qk031 R-spondin 1 LR5（在含0.5%胎牛血清的DMEM中稀釋）處理細(xì)胞，并在Wnt條件培養(yǎng)基（1:8稀釋）存在的情況下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每組三個(gè)重復(fù)。細(xì)胞培養(yǎng)過夜后，通過發(fā)光法測量熒光素酶活性。數(shù)據(jù)來自Qk031批次#104286。EC?? = 476 ng/ml（38 nM）。與野生型R-spondin 1 Qk006（72.7 ng/ml，6 nM）相比，EC??較高，這是由于HEK293細(xì)胞上的受體群體所致。

SDS-PAGE分析

在非還原（NR）條件下，重組R-spondin 1 LR5蛋白以16 kDa的單一帶遷移；在還原（R）條件下，遷移為13 kDa。1 ?g純化重組蛋白通過15%（w/v）SDS-PAGE在還原（+β-巰基乙醇，R）和非還原條件（NR）下分離，并用考馬斯亮藍(lán)R250染色。數(shù)據(jù)來自Qk031批次#104286。

艾美捷科技是QKine的合作特約伙伴，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。