SiR-肌動蛋白基于F-肌動蛋白結合天然產物茉莉素內酯。SiR-肌動蛋白具有熒光、細胞滲透性和對 F-肌動蛋白的高度特異性。Sir-肌動蛋白染色內源性 F-肌動蛋白，無需遺傳操作或過度表達。它在遠紅光中的發(fā)射最大限度地減少了光毒性和樣品自發(fā)熒光。SiR-肌動蛋白與GFP和/或m-櫻桃熒光蛋白相容。它可以使用標準 Cy5 濾光片集進行成像。SiR-肌動蛋白可用于活細胞和組織中的寬場、共聚焦、SIM 或 STED 成像。探針數(shù)量允許 50 – 200 次染色實驗。   

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Cytoskeleton公司目前主要的產品有340余種，其產品主要覆蓋肌動蛋白，微管蛋白，馬達蛋白，小G蛋白，細胞外基質，活細胞成像等相關領域，提供對應的蛋白質，抗體，檢測與分析試劑盒，并且產品線還在不斷的擴大中。

SiR-Actin 試劑盒常見問題：

問題 1.什么是STED顯微鏡，它是如何工作的？

回答 1.STED 顯微鏡代表 受激發(fā)射消耗顯微鏡。它是一種超分辨率顯微鏡，可以捕獲比受光衍射限制的傳統(tǒng)光學顯微鏡更高分辨率的圖像。STED使用2個激光脈沖，一個是激發(fā)熒光團的激發(fā)脈沖，使其發(fā)出熒光。第二個脈沖稱為STED脈沖，通過在中心焦點周圍的區(qū)域進行受激發(fā)射來去激發(fā)熒光團，該區(qū)域未去激發(fā)，因此繼續(xù)發(fā)出熒光。這是通過將STED脈沖聚焦成環(huán)形（即所謂的甜甜圈）來實現(xiàn)的，其中中心焦點沒有STED激光脈沖，從而為熒光區(qū)域賦予高分辨率（圖1;有關STED顯微鏡的更多詳細信息，請參見參考文獻1）。 

問題 2.這些探頭的濾光片組是什么？

回答 2.SiR肌動蛋白和微管蛋白探針使用標準Cy5過濾器可視化。最佳激發(fā)波長為650 nm，發(fā)射波長為670 nm。我們建議使用激發(fā)波長為 630 + 20 nm 、發(fā)射波長為 680 + 20 nm 的濾光片（圖 2）。  

問題 3.為什么與其他熒光基團相比，SiR探針的背景較低？

回答 3.SiR探頭被近紅外/遠紅光譜范圍內的光激發(fā)并發(fā)射光，從而避免使用通常自發(fā)熒光的較短波長，例如藍光和綠光，從而導致更高的背景信號。SiR偶聯(lián)探針具有兩種物理狀態(tài)：1.非熒光閉合關閉狀態(tài)（螺內酯）和2.一個開放的、高度熒光的導通狀態(tài)（兩性離子）。探針與其配體靶標的結合有利于高熒光開放狀態(tài)，而游離未結合探針處于封閉的非熒光狀態(tài)（圖3）。熒光擴增是從未結合狀態(tài)到結合狀態(tài)的100倍。這導致了高度靈敏的生物傳感器，其中大多數(shù)熒光僅以結合狀態(tài)發(fā)生（參見參考文獻3和4）。  

圖1

圖2

圖3

SiR-Actin 試劑盒相關文獻：

1. Hell S.W. and Wichmann J. 1994. Breaking the diffraction resolution limit by stimulated emission: stimulated-emission-depletion fluorescence microscopy. Opt. Lett. 19, 780-782. 

2. D’Este E. et al. 2015. STED nanoscopy reveals the ubiquity of subcortical cytoskeleton periodicity in living neurons. Cell Rep. 10, 1246-1251. 

3. Lukinavicius G. et al. 2013. A near-infrared fluorophore for live-cell super-resolution microscopy of cellular proteins. Nat. Chem. 5, 132-139. 

4. Lukinavicius G. et al. 2014. Fluorogenic probes for live-cell imaging of the cytoskeleton.Nature Methods. 11, 731-733.    

Cytoskeleton專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發(fā)與生產。公司提供藥物篩選、信號轉導、蛋白質轉錄后修飾（PTM）、細胞骨架研究相關的系列試劑盒和產品，尤其以細胞骨架相關研究見長，既能滿足于樣品較少的科學研究，也可以用于小規(guī)模篩選研究和高通量大規(guī)模篩選研究。此外，公司還提供微管蛋白，肌動蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等現(xiàn)有產品的藥物篩選服務。