一、產(chǎn)品概述

DB3.1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的基因型為：F-gyrA462 endA1△(sr1 - recA) mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) supE44 ara - 14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(Sm R) xyl - 5 λleu mtl1。

Abbexa DB3.1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是專為DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化而設(shè)計(jì)的。這種細(xì)胞含有 gyrA462 基因，能夠抵抗 ccdB 基因產(chǎn)生的毒性效應(yīng)，并且對(duì)鏈霉素具有抗性。該產(chǎn)品可用于轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增含有 ccdB 基因的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化效率超過108cfu/ug DNA（經(jīng) pUC19 質(zhì)粒 DNA 測(cè)試）。

產(chǎn)品規(guī)格為 1ml，包含 10×100ul 感受態(tài)細(xì)胞、20ul（0.1ng/ul）對(duì)照質(zhì)粒 pUC19 和 10ml SOC 培養(yǎng)基。艾美捷作為Abbexa中國(guó)區(qū)代理商，為大家整理了一份DB3.1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞中文說明書。

二、存儲(chǔ)與使用說明

（一）存儲(chǔ)條件

DB3.1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)存儲(chǔ)于 - 70℃，最長(zhǎng)可保存 6 個(gè)月。請(qǐng)勿在液氮中保存，避免反復(fù)凍融。

（二）使用說明

1. 準(zhǔn)備材料：將水浴鍋預(yù)熱至 42℃。將 SOC 培養(yǎng)基或 LB 培養(yǎng)基置于室溫下回溫。將含抗生素的選擇性平板在 37℃下預(yù)熱 30 分鐘。

2. 感受態(tài)細(xì)胞解凍：將 100ul DB3.1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞置于冰上解凍。將 50ul 細(xì)胞分裝至預(yù)冷的 1.5ml 離心管中，然后加入目標(biāo) DNA（1 - 5ul）。切勿通過反復(fù)上下移液來混合，將細(xì)胞置于冰上靜置 30 分鐘。

3. 熱激處理：將細(xì)胞在 42℃下熱激 45 秒，期間不要搖晃。熱激完成后，立即將試管轉(zhuǎn)移至冰上，靜置 2 分鐘，同樣不要搖晃。

4. 細(xì)胞復(fù)蘇：向試管中加入 500ul 預(yù)熱的 SOC 培養(yǎng)基或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），充分混勻后在 37℃、200rpm 的條件下振蕩培養(yǎng) 1 小時(shí)，以促進(jìn)細(xì)胞復(fù)蘇和抗生素抗性基因的表達(dá)。

5. 涂布平板：從每個(gè)轉(zhuǎn)化管中取 20 - 200ul 涂布于預(yù)熱的選擇性平板上。未涂布的細(xì)胞可在 4℃下保存，如有需要，第二天可繼續(xù)涂布。

6. 平板培養(yǎng)：將平板倒置，置于 37℃下過夜培養(yǎng)。

7. 篩選與分析：挑選單菌落，通過限制性酶切、PCR 或測(cè)序等方法進(jìn)行分析。

三、Abbexa-DB3.1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞（abx098865）特點(diǎn)：

1. 高效的轉(zhuǎn)化能力：DB3.1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率超過 108cfu/ug DNA，能夠有效轉(zhuǎn)化目標(biāo) DNA，為實(shí)驗(yàn)提供高效率的轉(zhuǎn)化保障。

2. 抗性基因優(yōu)勢(shì)：該細(xì)胞含有 gyrA462 基因，使其能夠抵抗 ccdB 基因產(chǎn)生的毒性，同時(shí)對(duì)鏈霉素具有抗性，這使得它在處理含有 ccdB 基因的質(zhì)粒時(shí)具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，避免了因毒性導(dǎo)致的轉(zhuǎn)化失敗，也方便在含有鏈霉素的培養(yǎng)基中篩選轉(zhuǎn)化子。

3. 廣泛的應(yīng)用范圍：適用于多種質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增，為分子克隆、基因表達(dá)等實(shí)驗(yàn)提供了可靠的工具，尤其在涉及 ccdB 基因的實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出色，為相關(guān)研究提供了便利。

四、注意事項(xiàng)

1. 僅限研究使用：本產(chǎn)品僅供研究使用，不得用于診斷、治療、美容程序或人類及動(dòng)物食用。

2. 運(yùn)輸與保存：產(chǎn)品在運(yùn)輸過程中會(huì)使用干冰。收到后請(qǐng)按照上述存儲(chǔ)條件進(jìn)行保存。

3. 操作建議：為了獲得更高的轉(zhuǎn)化效率，建議在感受態(tài)細(xì)胞解凍后立即進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作，避免反復(fù)凍融。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，所有樣本和試劑都需要輕柔操作，以防止細(xì)胞受損或 DNA 降解。

4. 實(shí)驗(yàn)環(huán)境：確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和無菌，以避免雜菌污染，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

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